发动相关蛋白1参与糖尿病周围神经病变发病的相关机制研究及格列齐特的干预作用-神经病学专业论文.docxVIP

缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 Drp1 Dynamin-related protein l 发动相关蛋白 1 DPN Diabetic Peripheral Neuropathy 糖尿病周围神经病 变 8-OHdG 8-hydroxy-deoxyguanosine 8-羟基脱氧鸟苷 MDA Malonaldehyde 丙二醛 SOD Superoxide dismutase 超氧化物歧化酶 ROS Reactive oxygen species 活性氧自由基 NCV Nerve conduction velocity 神经传导速度 STZ Streptozotocin 链脲佐菌素 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 SDS Sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis 十二烷基硫酸钠-聚 丙烯酰胺凝胶电泳 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 PBS Phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液 TBS Tris Buffered Saline 三羟甲基氨基甲烷 缓冲盐水 TEMED Tetramethylethylenediamine 四甲基乙二胺 发动相关蛋白 1 参与糖尿病周围神经病变发病的相关 机制研究及格列齐特的干预作用 中文摘要 目的：1.腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立实验性糖尿病大鼠模型，并维持高血糖 环境；2.探讨发动相关蛋白 1（dynamin-related protein l,Drp1）在糖尿病周围 神经病变（Diabetic Peripheral Neuropathy，DPN）中的可能作用机制；3.探讨 格列齐特对 DPN 的干预影响，为临床 DPN 的治疗提供理论依据。 方法：采用 1%浓度的 STZ 一次性腹腔注射法诱导建立糖尿病大鼠模型。72 小时后 尾静脉取血测空腹血糖，血糖≥16.67mmol/L 为造模成功大鼠，并将成模大鼠随机 分为模型组（M 组）、格列齐特组（G 组），另设立窝别、鼠龄和体质量等条件匹配 的雄性大鼠为正常对照组（N 组）。饲养期间定期监测大鼠体重、血糖情况，做好 高血糖大鼠模型的质量控制。8 周后，观察大鼠的一般情况，测量体重、血糖及周 围神经传导速度（NCV），并留取双侧坐骨神经。左侧坐骨神经切断分别置入 10％ 甲醛溶液和‐80℃冰箱。右侧坐骨神经即刻制成 10%组织匀浆，用于氧化应激指标 测定。分别采用变色酸 2R-亮绿染色法观察形态学变化；免疫组化检测坐骨神经组 织中 Caspase-3、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）表达量；试剂盒法检测匀浆中丙二醛 （MDA）含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力及 Western blotting 检测 Drp1、Bax 和 Bcl-2 的表达。 结果：成模后，与 N 组相比，M 组和 G 组大鼠血糖明显升高，精神萎靡，活动性差， 进食水、尿量均增多，毛发晦暗。8 周后，M 组和 G 组大鼠体重较前增加不明显， N 组大鼠体重呈生理性增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；M 组和 G 组血糖仍高 于 N 组（P＜0.05），与 M 组相比，G 组血糖明显降低（P＜0.05）；与 N 组相比，M 组形态学改变明显，髓鞘厚度变薄，环形结构不完整，偶可见增生的间质成分， 部分髓鞘脱失并出现空泡样改变；M 组 NCV 明显减慢，Drp1、Bax、Bcl-2、Caspase-3、 8-OHdG 表达及 MDA 含量均增高，SOD 活力减低，差异有统计学意义（P＜0.05）； 与 M 组相比，格列齐特干预组坐骨神经组织形态学改变及 NCV 均有改善，Drp1、 Bax、Caspase-3、8-OHdG 表达及 MDA 含量均下降，SOD 活力增高，差异有统计学 意义（P＜0.05）。Bcl-2 表达亦有所下降，但差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论：Drp1 作为线粒体形状调控蛋白在机体氧化应激反应和细胞凋亡过程中发挥 重要作用。 Drp1 可能通过串联氧化应激和细胞凋亡两大重要发病机制学说，而参 与 DPN 发病。糖尿病大鼠坐骨神经中 Drp1 高表达，促进活性氧自由基（ROS)生成 和凋亡相关因子表达，从而参与并促进神经细胞凋亡。我们推测这可能是 DPN 重 要发病机制之一。格列齐特干预 Drp1 表达，下调血糖水平及机体氧化应激水平， 减少神经细胞损伤和凋亡，对糖尿病周围神经有一定的保护作用。 关键词 糖尿病周围神经病变；发动相关蛋白 1；格列齐特；氧化应激；细胞凋亡 Study on the Mechanism of Drp1 Promoting Onset