二硫化钼介导的Plk1基因沉默对肝癌细胞的影响-普通外科学专业论文.docxVIP

二硫化钼介导的 Plk1 基因沉默对肝癌细胞的影响 中文摘要 二硫化钼介导的 Plk1 基因沉默对肝癌细胞的影响 中文摘要 目的 探讨聚乙二醇修饰的二硫化钼作为基因载体的可行性及介导 Plk1 基因对肝 癌细胞的影响。 方法 1)采用化学剥离法合成了二硫化钼（MoS2）纳米片，再用高分子聚合物聚 乙二醇 (polyethylene glycol, PEG)、聚乙烯亚胺 (polyethylenimine, PEI)层层修饰为 MoS2-PEG-PEI，并对合成的二硫化钼材料进行表征研究。2)通过体外细胞毒性试验 对二硫化钼纳米材料进行体外毒性实验。3)用凝胶阻滞电泳实验检验二硫化钼纳米材 料和小干扰 RNA（small interfering RNA，siRNA）的结合能力。4)以 MoS2-PEG-PEI 材料作为 siPlk1 的载体，对人肝癌细胞株（HepG2 细胞）进行转染，通过共聚焦显 微镜观察细胞摄取 MoS2-PEG-PEI/siRNA 复合物情况。5)通过 Western blotting 以及 RT-qPCR 实验研究 MoS2-PEG-PEI 介导的 siPlk1 转染对肝癌细胞蛋白及 mRNA 表达 水平的影响，并通过流式细胞技术观察肝癌细胞的凋亡情况。 结果 1)单层二硫化钼纳米片进行了 LA-PEG 修饰和加聚 PEI 支链后，所得到的 MoS2-PEG-PEI，具有较好的稳定性，并带有正电荷； MoS2 、MoS2-PEG 的 Zeta 电 位分别为?17.9 and -8.9 mV。MoS2-PEG 聚合带正电荷的 PEI 涂层后 Zeta 电位增加为 19.9 mV，带有更多正电荷 2)MoS2, MoS2-PEG 和 MoS2-PEG-PEI 均无明显细胞毒性。 3) 当 N/P 比在 5 以上时，凝胶电泳结果显示 MoS2-PEG-PEI 明显阻滞 siRNA。4) 共 聚焦显微镜显示 MoS2-PEG-PEI/siRNA 成功转染 HepG2 细胞。5）Western blotting 以 及 RT-qPCR 实验结果均表明，MoS2-PEG-PEI/siRNA 沉默 HepG2 细胞相关蛋白表达。 6）流式细胞技术检测显示，将 MoS2-PEG-PEI 作为 siPlk1 载体转染肝癌 HepG2 细胞， 可使肝癌细胞凋亡。 结论 二硫化钼纳米片通过表面修饰后所得到的MoS2-PEG-PEI无明显的细胞毒 性，具有良好的生物相容性，可以作为siPlk1的载体转染肝癌细胞，有较高的转染效 率，并可下调肝癌细胞Plk1蛋白的表达，导致肝癌细胞的凋亡。因此，MoS2-PEG-PEI 可以作为一种纳米载体，用于肝癌肿瘤的基因治疗。 I 中文摘要 二硫化钼介导的 Plk1 基因沉默对肝癌细胞的影响 [关键词] 二硫化钼；非病毒载体；肝癌；基因治疗 作 者：寇忠阳 指导老师：曹 苇 二硫化钼介导的 Plk1 基因沉默对肝癌细胞的影响 英文摘要 Gene therapy of hepatocellular carcinoma using Plk1 gene silencing mediated by PEGylated MoS2 nano-sheets Abstract Objective To study the PEGylated MoS2 Nano-sheets serving as gene carrier for gene delivery and siPlk1 mediated in vitro gene therapy for hepatocellular carcinoma. Methods 1) MoS2 nanosheets were synthesized by the Morrison method and then subsequently modified by lipoic acid-modified polyethylene glycol (LA-PEG) and branched polyethylenimine (PEI) with molecular weight (MW) of 25 kDa to obtain MoS2-PEG-PEI whose exosyndromes were evaluated. 2) The cytotoxicity of MoS2, MoS2-PEG, and MoS2-PEG-PEI was evaluated by MTT assay using different cell lines. 3) The ability of MoS2-PEG-PEI combin of siRNA was evaluated by agaros