肿瘤精准靶向治疗课件.ppt

已发现并确认至少9种EML4-ALK融合基因的突变体：v1、v2、v3a、v3b、v4、v5a、v5b、v6、v7 检测方法：RT-PCR, FISH, PCR-测序等 EML4和ALK两个基因分别位于人类2号染色体的p21和p23带 克唑替尼的靶标——EML4-ALK融合基因 靶向EGFR的抗肿瘤药物 类别一：小分子酪氨酸激酶抑制剂（ EGFR －TKI) 作用机制：抑制EGFR胞内区酪氨酸激酶活性，阻断EGFR信号通路； 药物代表：吉非替尼（阿斯利康）；厄罗替尼（罗氏）。 类别二：单克隆抗体(mAb) 作用机制：与EGFR胞外区结合，阻断配体与EGFR的结合； 药物代表：西妥昔（默克）；贝伐单抗（罗氏）。 基因EGFR热点突变位点 EGFR主要突变在：外显子18，19，20，21 耐药突变：T790M 靶向药物西妥昔单抗靶标——K-ras基因检测 NCCN明确指出西妥昔单抗（爱必妥）用药之前须检测K-ras基因突变检测； K-ras突变型患者并不能从抗EGFR治疗（爱必妥）中获益,反而徒增不良反应危险和治疗费用； 中国人群中K-ras基因突变率15% ！ 15%的病人不应该使用爱必妥！ 野生型 突变型 World J Gastroenterol. 2011 November 21; 17(43): 4779-4786. 基因KRAS热点突变位点 * KRAS主要突变在： 外显子2（密码子12，13 ），3（密码子61） 个体化检测平台 基因突变检测 ——ARMS技术，测序等 ARMS技术——普通PCR 等位基因特异性扩增法（Allele Specific Amplification，ASA）建立于1989年，是PCR技术应用的发展，也称扩增阻滞突变系统（Amplification Refractory Mutation System?，?ARMS）、等位基因特异性PCR（Allele Specific PCR，?ASPCR）等。 方法： 2条正向引物（针对正常DNA，突变DNA） 1条反向引物 2个平行的PCR反应 普通PCR仪 应用：对微量突变进行检测。 TaqMan-ARMS技术 TaqMan-ARMS探针技术基于实时PCR平台，结合了ARMS突变富集和Taqman-MGB特异性荧光检测两种技术。 Taqman-MGB：针对SNP位点特异性扩增的探针，可区分一个碱基的突变。 一个PCR体系中：1对引物，1条探针 每个位点需要做至少两管PCR扩增！！！ SNP位点检测应用 检测方法/检测灵敏度 100% 50% 5% 1% 0.01% 耗时 费用 直接测序法 +++ ++ - - - 6h 低 Taqman-ARMS? +++ +++ +++ +++ - 1.5h 中等 焦磷酸测序法 +++ ++ + - - 6h 中等 Taqman QPCR技术 +++ +++ +/- - - 2h 中等 EGFR基因突变检测方法灵敏度的比较 测序技术发展历程 Sanger Sequencing （1977） Ion Semiconductor Sequencing （2011） Next-Gen Sequencing （2005以后） Ion Torrent半导体测序原理 Ion Torrent半导体测序平台及芯片 PI芯片：sequence exomes and whole transcriptomes（5Gb） 肿瘤类型 靶向药物 基因 样本 疗效佳的情况 非小细胞肺癌 易瑞沙（Iressa） 特罗凯（Tarceva） EGFR KRAS 手术/穿刺/ 胸腹水/血浆 EGFR突变/KRAS野生 克唑替尼 EML4-ALK融合 手术/穿刺/ 胸腹水 阳性 胃肠间质瘤 格列卫（Gleevec） C-Kit PDGFRA 手术/穿刺/内镜活检/血浆 C-kit第11外显子突变/PDGFR突变 慢性粒细胞白血病 格列卫（Gleevec） 达沙替尼(Dasatinib) 尼罗替尼(Nilotinib) ABL 骨髓/全血 无T315I突变 乳腺癌 拉帕替尼（Lapatinib） PI3K 手术/穿刺/内镜活检/血浆 野生型 赫塞汀 Her-2 病理切片 高表达/表达阳性 目前成熟的肿瘤分子靶向药物敏感性基因检测 基因表达量（mRNA）检测 ——指导个体化化疗 可使标准化疗方案得到个体化应用 mRNA检测主要技术特色 采用荧光定量PCR技术，采用内参比RNA作为质控对照，应用beta-actin作为内对照，定量检测检测目的基因mRNA表达水平。 适用于各种肿瘤组织检测，包括石蜡标本、穿刺标本、冰冻活检标本等