姜黄素诱导胃癌细胞凋亡中MirRNA表达谱的分析.docVIP

姜黄素诱导胃癌细胞凋亡中MicroRNA表达谱的分析 李强王斌生(通讯 )柴琛 (兰州大学第一医院甘肃兰州730000) 】目的：研究姜黄素诱导胃癌细胞凋亡中MicroRNA表达谱的变化 和在致凋亡中的作用，为临床使用姜黄素治疗胃癌提供理论依据。方法.?将 BGC823和SGC7901两种胃癌细胞系分别培养于含10%胎牛血清、1000U/ml青链 霉素的RIMP1640培养基，分別采用DMSO, 10uM, 50uM姜黄素进行感染处理 48小时后采用流式细胞术对各组细胞凋亡情况进行检测，同时采用miRNA芯片 技术检测miRNA的表达，筛选表达差异miRNA，进行层次聚类分析。结果随着 姜黄素作用浓度的升高，BGC823和SGC7901两株胃癌细胞株的凋亡率逐渐上升， 两种细胞株50uM姜黄素处理组凋亡率较10uM组升高约3倍左右，与对照组相 比，姜黄素处理组凋亡率明显升高，P均小于0.01。MicroRNA芯片分析显示在 初步筛选出的129条MicroRNA中，与10uM姜黄素处理组相比，50uM姜黄素 处理组表达差异在2倍以上的MicroRNA共计6条，上调表达MicroRNA2条，分 别为 miR-150 和 miR-34a；下调表达 MicroRNA 共计 4 条，分别为 miR-92b、miR-650、 miR-9和miR-125b。结论:姜黄素诱导可使胃癌细胞系BGC823和SGC7901的 MicroRNA表达谱发生变化，提示某些MicroRNA可能参与了姜黄素所致胃癌细胞 凋亡。 关键词】姜黄素；胃癌；MicroRNA；表达谱 】R735.2 】A 】2095-1752 (2016) 17-0160-03 胃癌是我岡最为常见的恶性肿瘤之一，我国胃癌的发病率高居所有癌症发病 率之首，严重威胁着人们的健康和经济水平。目前对于胃癌的治疗仍以手术治疗 为主，但仍有相当一部分胃癌患者不其有手术指症需要化疗，或手术患者术后长 期的化疗对于患者的远期毒性损伤较大［1］。中国传统中药姜黄素(curcumin/Zur) 是一种从姜黄、莪术等姜黄属植物的根茎中提取出来的脂溶性酚类色素，作为一 种天然安全的添加剂和染色剂广泛应用于食品工业之中［2］。研究表明姜黄素是 一种具有多种生物活性的中药单体，能够杀伤多种肿瘤细胞［3】。微小 RNA(microRNA,miRNA)是细胞内高度保守的非编码RNA,参与了包括肿瘤在内的 多个病理生理过程［4】。有研究表明姜黄素可能通过调控miRNA机制发挥抗癌作 用［5】。因此本研究通过研究miRNA在姜黄素致胃癌细胞凋亡中的作用和相关机 制研宄，为临床中药治疗胃癌提供基础理论依据。 材料与方法 1.1细胞株及试剂 胃癌细胞系采用BGC823和SGC7901两株。姜黄素购自陕西听泰生物科技发 展有限公司，分子式：C21H20O6,分子量：368.37,纯度99%,用DMSO配成 lmol/L的原液，-20aC冻存备用。 1.2细胞培养 将BGC823和SGC7901细胞分别培养于含10%胎牛血清、1000U/ml青链霉 素的RIMP1640培养基，放置于37°C, 5% CO2的恒温细胞培养箱内，每2?3d 更换培养液待细胞融合大于80%后使用胰蛋白酶消化细胞，种板培养或传代。待 细胞稳定后分别将BGC823和SGC7901细胞以105/ml密度接种于96孔板中，加 入200mu; L RIMP1640完全培养液,加入不同浓度姜黄素(10mu;M、50mu;M) 处理。 1.4细胞凋亡检测 姜黄素作用48h后收取各组细胞,PBS洗2次，离心机800r/min,离心5min, 弃上清。加入195mu;L AnnexinV-FITC结合液重悬细胞。加入5mu;L Annexin V-FITC,轻轻混匀，室温避光孵育10分钟。800r/min离心5min,弃上清，加入 190mu;L Annexin V-FITC结合液重悬细胞。加入10mu;L PI染色液,轻轻混匀, 冰浴避光孵育。流式细胞仪检测。 1.5 MicroRNA芯片分析 两种细胞系对照组，10uM和50uM处理组各收集ltimes;108细胞，分别 加入ImLTrizol抽提RNA,经纯度检测后送康成生物工程奋限公司进行MicroRNA 芯片分析。原始数据获得后首先去除背景值后进行归一化分析。筛选与凋亡相关 MicroRNA的表达谱。 1.6统计学分析采用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数 plusmn;标准差表示，凋亡相关MicroRNA分析以与空白对照组相比，10uM姜 黄素处理组表达差异在2倍以上；与10uM姜黄素处理组相比，50uM姜黄素处 理组表达差异在2倍以上的MicroRNA,以Plt;0.