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金银花组培快繁技术的研究 　　摘要 为在短时间里比较简便地获得获得大量优质的金银花种苗，采用组培方式选取当年生长健壮的无病虫害的带芽茎段为外植体在春季上午露水干燥后取材，清洁处理后，并用75%乙醇溶液15 s和0.1% HgCl2溶液7 min进行常规灭菌[1]。选用MS+6-BA 0.50 mg/L+NAA 0.1 mg/L+糖30 g/L+琼脂6 g/L生芽诱导培养基进行生芽诱导培养，随后转入到MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+糖30 g/L+琼脂6 g/L的增殖培养基中增殖培养，以求获得更多的繁殖材料，最后以1/2MS+NAA 2.5 mg/L+活性炭200 mg/L+糖30 g/L+琼脂6 g/L为生根培养基进行生根培养，并进行驯化移栽。结果表明，利用金银花当年生长健壮的无病虫害的带芽茎段可以获得健壮的金银花组培苗。通过转接后的增殖培养，扩大原有组培苗的数量从而保证大规模种植的用苗需求，同时为其他金银花组培快繁提供技术借鉴。 　　关键词 金银花；带芽茎段；组织培养 　　中图分类号 S567.79 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）22-0114-02 　　金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬（Lonicera Japanica Thunb）及同属多种植物的干燥花蕾，为多年生半常绿藤本植物，既有保健、药用功能，又有观赏和生态功能，因而被国务院确定为名贵中药材之一[2-3]。由于其功效繁多，如清热消毒、消炎、增加抵抗力、抗病毒等，因而被广泛应用于制药、香料、化妆品、食品等领域[4-5]。金银花的主要功能是清热解毒，可以在滥用抗生素带来严重后果的情况下发挥其作用，防治SAS、H1N1病毒病[6]。另外，金银花还含有多种抗氧化活性成分，可降血脂，用于预防治疗心脑血管疾病。由于用量逐年增加，许多地区都在尝试大面积种植。 　　金银花一般采用扦插、嫁接、分株或压条繁殖，繁殖系数小，育苗周期长，且易传染病菌，品种退化快。由于遇到种苗繁殖这一难题，人工大规模种植都没取得预期效果[7]。 　　植物组织培养能保持母株的优良性状，具有繁殖系数高，可周年生产，可实现金银花良种苗木规模化工厂生产[7]。本文采用当年生幼嫩的带芽茎段以组织培养的方式进行金银花良种的快速繁殖并取得了一定进展。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　不同外植体的选择及取材时间对金银花组培外植体的存活和诱导芽的形成影响较大。春秋以顶芽为外植体，而4个季度带有对生叶芽的茎段的灭菌效果较差，易产生褐化、污染和不萌发等情况，成活率很低[8]。为了取材方便，多数仍选用当年生带叶芽的茎段，接种时剪成1.5～3.0 cm长；也可用顶芽繁殖。2016年3月23日10：00取学院药材圃种植的当年生长状况良好、无病虫害、离地面较高的金银花顶芽、茎条作试验材料。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 材料预处理。外植体在流水情况下用软毛刷洗去表面的灰尘和附着物等，再剪成段并在流水下冲洗2～4 h。 　　1.2.2 灭菌。在超净工作台中把清洗好的外植体倒入75%乙醇中灭菌15 s然后倒出酒精，然后用加入1～2滴吐温―80的0.1% HgCl2消毒5 min，灭菌过程中要用手摇灭菌，以加大灭菌效果，最后用无菌水冲洗6～7次，直到起指示作用的吐温―80冲淡到不形成泡沫[9]，再在接种盘里用镊子和解剖刀把材料切成带有1个顶芽或1～2个腋芽的茎段接种到培养基中培养。 　　1.2.3 培养。把经表面灭菌的金银花顶芽或带侧芽的当年生茎段接种在配置好的培养基中培养，培养室条件为温度23～27 ℃、相对湿度65%～85%、光照强度1 500 lx、光照时间12 h。 　　2 结果与分析 　　2.1 启动培养结果 　　金银花启动培养的培养基为 MS+6-BA.0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+糖30 g/L+琼脂6 g/L。 　　在接种室超净工作台上按无菌操作要求，将材料接入装有灭菌后启动培养基的试管中，每个外植体接1个试管按要求包好试管。为防止污染每接种5～6个外植体对接种工具进行消毒1次。金银花外植体共接种50个，接好后转入人工控制的培养室中。在培养室培养5 d后转接材料开始萌动，经过10 d顶芽开始逐渐变绿，也逐渐伸长。带腋芽的茎段也变得更绿，剥离?~柄处开始凸起，基部形成的瘀伤组织也渐渐增大，4周后形成丛生芽（表1）。总体上看成活率比较理想，但是出现的问题也不少，在灭菌过程中出现材料失活率大、真菌和细菌污染问题。茎尖失活5株、茎段失活6株，在随后的培养过程中有4瓶真菌和2瓶细菌污染并出现了1瓶材料褐化。 　　分析原因：一是材料老嫩不一，灭菌时没有按材料情况分等级后再进行分批控制时间灭菌，从而导致部分材料灭菌时