AYLS7336脑脊液标本细菌学检验标准操作30.docVIP

编写者：沈继录 审核者： 批准人： 生效门期：2012.1.1 文件发放范围：微生物组 文件年度审核 审核者： 审核者： 审核者： 审核者: 曰期： 円期： 円期： 曰期： 脑脊液标本细菌学检验标准操作 1?目的 规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 适用范围 脑脊液培养。 标本 3.1标本类型脑脊液。 3.2标本米集 3.2.1可发生在不同年龄。成人一般表现为发热、头疼、恶心、呕吐、颈项强直和反射增强； 婴儿和新生儿为不明确和无特异性，对婴儿不明原因的发热，应怀疑为脑膜炎。这种情况下 建议检杏脑脊液。 3.2.2标本采集由临床医生以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液3-5ml,盛于无菌容器屮送检。 脑膜炎奈瑟菌离体后能产生H溶酶，迅速H溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易死亡。 W此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检。 3.3标木把收标准 3.3.1标木标识与化验中请单不符。 3.3.2标本未用无菌试管留取。 试剂、仪器 4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板、相关生化试 剂等。 4.2 VITEK 鉴定系统；GPI、GNI、NFC、YBC、ANI、BAC、GNS-120、GPS-106 均购于法 国生物梅里埃。 4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。 细菌鉴定和药敏质控 参见《质量管理程序》。 检验步骤 接受标本后，立即对标本进行编号、登记。 6.1肉眼观察和涂片检菌 6.1.1首先观察脑脊液的外观，除结合性脑膜炎、无菌性脑膜炎外，其他细菌引起的化脓性脑 膜炎，脑脊液多呈明显混浊，经抗生素治疗后，亦吋不混浊或轻度混浊。外观浑浊或脓样脑 脊液可直接涂片，无色、透明的脑脊液，应300r/min离心10-15分钊?后取沉淀物涂片、革兰 染色、镜检。根据染色及形态特征，常可初步提示细茼的种类。 6.1.2革兰染色:浞浊或脓性脑脊液可直接涂片，染色镜检，无色透明的脑脊液，应以3000r/min 离心，10?15min，取沉淀物涂片，行革兰染色，镜检.。根据染色及细菌形态特征，常可初步提 示感染细菌的种类。如：（1）检到革兰阴性、凹面相对的球菌，而大小着色深浅常不一致。 在细胞数量甚多的标木屮，细菌数量甚少，并常位于细胞内（但在早期病人的脑脊液屮，细 胞较少时，也可见到较多的双球茼位于细胞外）。上述情况，可报告“找到革兰阴性双球茼， 位于细胞（外）PJ,形似脑膜炎奈瑟菌”。（2）革兰阳性、菌体周围有明显荚膜双球菌，可报 告“找到革兰阳性球菌，形似肺炎链球菌”。（3）革兰阴性、多形性、菌体大小不一，宥秆状 或丝状的细菌，可报告“找到革兰阴性杆菌”。（4）检到革兰阳性孢子或菌丝，可报告“找到 真菌孢子或菌丝” 6.1.3抗酸染色：4000转/min离心脑脊液30min，取沉淀物作餘片，丁?燥，固定后，经抗酸染 色，如检到抗酸杆菌，可报告“找到抗酸杆菌”。 6.1.4墨汁染色:脑脊液离心（3000转/min, 10?15min）后,取沉淀物进行墨汁 染色，显微镜下町在黑色背景中，检到菌体周围冇透明荚膜，似一晕轮，冇时出芽。可报告 “找到新型隐球菌”。 6.2分离培养 用接种环挑取浞浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种丁?琼脂f?板及巧克力琼脂f?板上, 置于5%-10%CO2环境中培养18?24h，检视宥无细菌生长.。根据菌落特点及染色盾镜检的特征, 初步判定细菌种类，并进一步作生化反应及血清学检验，加以鉴定，并作出报。 操作流程 结果报告 无论是涂片还是培养，一旦检到阳性应立即电话或书面通知临床医生，培养并鉴定的结果报 告“XXX菌”，同时报告药敏结果。经培养48小时，仍无细菌生长者， “报告培养2 H无细菌生长”。 正常脑脊液为无菌。一旦检到细菌即为病原菌。 10.注意事项 抽取的脑脊液分置于无菌试管中，迅速送至实验室，病毒、真茼、分枝杆蘭培养样本 置4°c保存待送。 流感嗜血杆菌容易在外界环境中死亡，脑膜炎奈瑟菌对寒冷和干燥均很敏感，在体 外容易自溶，故不论是涂片镜检还是进行培养，均应及吋送检。 11临床意义 正常人的脑脊液是无茼的，检出细尚提示细茼性（急性化脓性或结核性等）脑膜炎。化脓性 脑膜炎最多见脑膜炎奈瑟菌，肺炎链球菌居第二位。3个月至5个月儿童细菌性脑膜炎的主 耍致病菌是流感嗜血杆菌，新生儿脑膜炎多由大肠埃希 菌、B群溶血性链球菌和脑膜败血黄杆蘭引起的，特别是早产儿。结核分枝杆蘭引起结核性 脑膜炎。85%脑脓肿病人脑脊液培奍可检岀厌氧菌，奋吋可为厌氧菌和需氧菌混合感染。 12危急值报告 直接涂片找到细菌或培养阳性均作危急值报告。若检测出脑膜炎奈瑟菌则应做传染病报告。 13 13.1《当代细菌检验与临床》2000年3月出版 13.