雌激素对绝经前后女性肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa作用的研究-生理学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 雌激素对绝经前后女性肠系膜动脉平滑肌细胞 １BKCa 作用的研究 １ 摘 要 目的：原发性高血压病是严重危害人类健康的常见病之一，主要表现 为小动脉和微动脉张力的增加，血管壁不能对抗血管紧张度增高以及 对血管活性物质的反应性出现异常，临床表现为血压的持续增高；人 体肠系膜血管是人体主要的内脏血管，在动脉中占有较大比例，而且 是形成外周阻力的主要动脉，对血管活性物质敏感，对人体血压的调 节具有举足轻重的作用；大电导钙激活钾通道（large-conductance calcium-activated potassium channels，BKCa）是动脉平滑肌上主要的 负 反 馈 调 节 器 ， 在 血 管 的 舒 缩 调 节 中 发 挥 着 重要 作 用 。 雌 激 素 （estrogen, E）是女性体内重要的激素之一，具有很多的生物学效应。 流行病学调查显示, 原发性高血压病具有明显的性别差异，绝经前妇 女原发性高血压的发病率明显低于同龄的男性发病率，但在女性绝经 后则不存在这样的差异。研究显示，雌激素在女性心血管功能正常的 维持和调节方面具有重要的意义，其机制有可能与通过雌激素受体 （Estrogen Receptor, ER）调节其动脉平滑肌的结构和功能有关，但具 体机制尚不明确。本实验采用穿孔全细胞膜片钳技术，通过观察绝经 前后女性肠系膜动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells， VSMCs）BKCa 宏观电流及自发性瞬时外向电流(spontaneous transient outward currents ， STOCs) ， 并 研究 E 对 绝经 前 女 性 非 高 血 压 １ 国家自然科学基金（NO （pre-menopause women non-hypertension，PNH）组、绝经后女性非 高血压（post-menopause women non-hypertension, NH）组及绝经后女 性原发性高血压(post- menopause women essential hypertension, EH)组 肠系膜动脉平滑肌细胞上 BKCa 及 STOCs 敏感性变化，探讨 E、BKCa 与女性原发性高血压病之间的关系，为 E 对女性心血管系统的保护作 用提供实验依据。方法：在体式显微镜下，游离出肠系膜动脉，并纵 向剖开剪成 2 mm×2 mm×1 mm 的动脉条块，放在酶液中进行两步酶 消化。选取表面光滑、折光性好、立体感强的平滑肌细胞进行实验。 采用穿孔全细胞膜片钳技术记录通道电流。记录到的电流信号经过膜 片钳放大器放大，经过 AD/DA 转换器处理后输入计算机， 采用 Clampfit 10.1、MiniAnalysis 6.0、OriginPro8.0 软件进行数据分析处理 统计。比较绝经前 PNH 组、绝经后 NH 组和 EH 组应用 E 前后 BKCa 宏观电流及 STOCs 的变化。结果：（1）采用两步急性酶法分离的女 性肠系膜动脉平滑肌细胞 BKCa 宏观电流和 STOCs 的基本特性： ①BKCa 宏观电流具有明显的电压依赖性和外向整流特性；STOCs 的 幅度和频率具有显著的电压依赖性，并随机叠加在 BKCa 宏观电流上。 ②200 nM 的 BKCa 特异性阻断剂 Iberiotoxin（IbTX）可明显抑制宏观 外向电流以及阻断 STOCs 。（2）绝经前女性 PNH 组 BKCa 宏观电流 及 STOCs 对雌激素反应性变化：雌激素可显著激活 PNH 组上 BKCa 宏观电流和 STOCs。在测试电压 0mV 到+60mV 范围，100 μM E 可 显著性激活 BKCa 宏观电流，在 0 mV 和 +60 mV 时其电流密度分别 从 1.98 ± 0.39 pA/pF、16.43 ± 4.90 pA/pF 增加到 4.45 ± 1.25 pA/pF （P0.05，n=7）、32.36 ± 6.86 pA/pF（P0.01，n=7）；电位为-20mV 时，STOCs 的幅度和频率分别从 8.98 ± 2.56 pA、3.05 ± 0.84 Hz 增加 到 16.88 ± 3.90 pA（P0.05，n=7）、5.26 ± 1.46 Hz（P0.01，n=7）。 （3）绝经后女性 NH 组 BKCa 宏观电流及 STOCs 对雌激素反应性变 化：雌激素可显著激活 NH 组上 BKCa 宏观电流和 STOCs。在测试电 压 0mV 到+60mV 范围，100 μM E 可显著性激活 BKCa 宏观电流，在 0mV 和 +60 mV 时其电流密度分别从 1.99 ±0.