雌激素对雌性大鼠盆底肌间成纤维细胞机械应力效应的影响-妇产科学专业论文.docxVIP

山西医科大学硕士学位论文 山西医科大学硕士学位论文 I I 雌激素对雌性大鼠盆底肌间成纤维细胞机械应力效应的影响 摘 要 目的： 研究17-β 雌二醇（17-β E2）在特定加力强度下对雌性大鼠盆底骨骼肌间成纤 维细胞中基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase -9，MMP-9）、金属蛋白酶 组织抑制剂-1（tissue inhibitor metalloproteinase，TIMP-1）及β -连环蛋白 （β -Catenin）的影响。 方法： 1.研究对象 取Wistar雌性大鼠6只均由山西医科大学实验中心供给，喂养2周左右， 体重平均120±30g，经各项体格检查均保持健康状况。对雌性大鼠的处理符合中华人 民共和国科学技术部颁发的《关于善待实验动物的指导性意见》[1]。 2.成纤维细胞原代培养 取Wistar雌性大鼠盆底骨骼肌间组织大约3-5mm，在体外 采用II型胶原酶对成纤维细胞原代培养、鉴定及纯化。选取体外稳定传代生长的3-5 代成纤维细胞，为后期17-β雌二醇干预提供实验基础。 3.成纤维细胞应力 对体外培养的成纤维细胞采用Flexercell4000外力加载系统， 同时设置特定加力时间为36小时和加力强度为6%。给予拉力后17-βE2继续分别培养 24小时，不加力及不加药组为对照组。 4.实时荧光定量PCR(RT-PCR) 分别提取每组细胞的mRNA，进行RT-PCR测定， 记录观察指标中每组的表达结果及电泳照相。 结果： 1.细胞培养情况 体外行骨骼肌间组织原代培养成纤维细胞成功后，将所培养的 细胞按照一定比例进行细胞传代。对原代培养出来的细胞进行免疫组化鉴定，结果显 示波形蛋白呈阳性反应，角蛋白呈阴性反应为成纤维细胞。 2.机械拉伸 在拉力时间为 36 小时和拉力强度为 6%的特定条件下，观察所培养 的细胞损伤性变化越来越明显。 II II 3. RT-PCR法检测结果示：加力强度为6%及加力时间为36小时与对照组比，成纤 维细胞中MMP-9mRNA表达量为2.69±0.02，高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 TIMP-1及β-catenin m-RNA的相对表达量分别为0.37±0.01、0.43±0.01，低于对照组， 差异有统计学意义。加力强度为6%及时间为36小时在17-βE2干预下，成纤维细胞 MMP-9mRNA相对表达量为1.52±0.07，高于对照组，低于加力组，差异有统计学意义 （P＜0.05），TIMP-1及β-catenin mRNA的相对表达量为0.60±0.01、0.63±0.01，低于对 照组，高于加力组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论： 本实验研究发现成纤维细胞受到机械拉伸后，在特定的加力条件下，加力强度为 6%及时间为 36 小时的条件下，成纤维细胞损伤性变化特别明显。荧光实时定量 PCR 检测拉力组 MMP-9 mRNA 表达量增加，TIMP-1 及 β-catenin mRNA 表达量下降，使 得 I 型胶原含量减少。而 17-βE2 干预后，使得拉力组应力表现减弱，从而证明雌激素 对盆底功能障碍性疾病具有保护作用。通过对成纤维细胞生物力学的研究，有助于揭 示肛提肌组织不同程度的损伤在盆腔器官脱垂的发病机制。 关键词：大鼠；盆底；成纤维细胞；机械拉伸力；17-β 雌二醇 PAGE PAGE IV Effect of estradiol on female rat’s pelvic myofibroblasts with mechanical Stress Abstract Objective: To observe the effects of 17-βE2 on matrix metalloproteinase-9,tissue inhibitor of metalloproteinase and β-Catenin of in the specific stressed pelvic skeletal muscle fibroblast of female rats. Methods: Research object: 6 female Wistar rats about 2weeks whose average weight is 120±30g are provided by experimental animal center of Shanxi Medical University. They kept healthy after physical examination. The processing method of animals is conformed to the science and