磁敏性羟基微球的构建及在固定青霉素酰化酶中的应用-微生物学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 固定化酶可以提高酶的稳定性并增加酶的使用次数，以及易与产 物和底物分离等优点而被广泛深入的研究。但目前常用的问定化方法 在制备固定化晤时隔活损失较大，限制了固定化酶的产业化应用 c 本 文针对目前固定化酶方法的不足之处提出了相应解决方法，并通过对 用于固定酶的磁敏性载体及固定化过程进行了深入细致研究，取得有 益的成果。 本文采用悬浮聚合法合成了 系列以磁性 F巳，0，为核心的甲基丙 烯酸挂乙酷一苯乙烯共聚球状磁性微球，经环氧氯丙惋 j舌化，制备活 化度达到 1600μ mollg ，粒径为120 200μm 的微球。通过对不同交 联度的活化微球进行固定化青霉素默化酶实验，发现交联度 30% 的微 球固定化酶效果最忧，并进一步对固定化青霉素散化酶的条件进行了 研究，得到了较好的固定化参数:给酶量为 2000L/ g(干时) ，反应时间 为 24h ，反应温度35 oc ，pH 为 8.0 。在此条件下进行酶固定化， 固定化酶活性为 782. 2U/ g( 于制)，固定化效率88. 72% ，活性回收率为 33. 63%; 水解青霉素 G 饵盐的最适温度为 45 0C ，最适PH 为 8. 5; 固 定化酶的储存和操作稳定性良好。除此之外，测定了酶促反应的动刀 学常数:溶液酶和固定化酶的米氏常数，分别为1.l 88x 1O-smol!L和 5 .879x i0-4 mol/L.苯乙酸的竞争性抑制常数为 2.685x 10-4mol!L 0 应用 苯乙酸作为酶定向化固定试剂，使酶固定化过程中活性回收比同等条 件下不加苯乙酸的提高 8.35%。 通过研究，最终获得了一种磁敏性、高性能的青霉素酷化酶载体 和应用酶竞争性抑制剂作为酶定向化固定的方法，不仅有一定的理论 意义，而且拥有巨大的经济价值，降低固定化青霉素酷化酶的生产成 本将大力促进我国日一内酷肢类抗生素的产业发展。 关键词:青霉素散化酶磁性进基载体环氧化固定化 I 摘要 ABSTRACT The immobílized e田ymes have more stability，mor巳 use times and easier separation from substrate and product than enzymes in bulk solution. But current immobilization methods have many disadvantag队 such as much enzyme activity lose after immobilization and high cost. So only a few immobilized e皿ymes have been used in industry widely though immobilized e皿yme have been studied for about thirty ye缸s. In order to resolve th巳se disadvantages ， new enzyme c部Tiers and lmmobilization methods need to be explored. ln this paper we put forward some solutions and synthesized a kinds ofnew en马明le c缸ners. The immobilized penicillin G acylase (PGA) has played an important role in the manufacture of semí synthetic antibiotics. Much effect is being made to develop new types of carrier to improve 出e catalytic efficiency of the e阻yme and reduce 也e cost of the suppo由. With suspension polymerization ，taking above nanometer magnetic Fe304 p缸ticles as nucleus ，and the copolymers of 2-hydroethyl methylate and styrene as macromolecular shell，hydroxyl magnetic microspheres were synthesized and activated with epoxyl chloropropane