缝隙连接在长QT综合征室性心律失常发生中的作用及其机制分析-内科学(心血管)专业论文.docxVIP

华 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 缝隙连接在长 QT 综合征室性心律失常 发生中的作用及其机制研究 华中科技大学同济医学院附属同济医院综合科 博士研究生：全小庆 导 师：张存泰 教授 中文摘要 长 QT 综合征(Long QT Syndrome, LQTS)是一种先天遗传性，或者后天获得的心 脏复极延迟的疾病。长 QT 综合征表现为心电图上 QT 间期延长，它可以引起室性早 搏及尖端扭转性室速(Torsade de Pointes，TdP)等致命性的心律失常，心源性晕厥和猝 死为长 QT 综合征常见并发症。长 QT 综合征患者心电图上 QT 间期异常延长，临床 上长 QT 综合征患者反复发生心源性晕厥、并常导致猝死的发生。 近年来许多研究表明，除了心脏复极时程的延长以外，跨室壁复极离散度 （transmural dispersion of repolarization，TDR）的增加在长 QT 综合征早期后除极（early afterdepolarization，EAD）的产生，以及心律失常 TdP 的诱发和维持中也起着重要作 用。长 QT 综合征中增大的 TDR 可使得 EAD 能够跨室壁传导，EAD 跨室壁传导导致 心脏的触发活动（比如 R-on-T 期前收缩）和致命性的心律失常 TdP 的产生。长 QT 综合征 TDR 的增加同时也可以通过二相折返的机制来维持 TdP 的发生。心脏各层心 肌细胞有着显著的电生理特性和功能上的差异，近年来一些研究表明心室壁各层心肌 细胞表面离子通道表达和功能的差异，使得跨室壁复极离散度异常增加。 心脏各层心肌细胞有着显著的电生理特性和功能上的差异导致了跨室壁复极离 散度的形成，而心肌细胞间之间通过缝隙连接耦连。心肌细胞的缝隙连接位于闰盘处， 动作电位通过缝隙连接从一个细胞扩布到相邻的细胞。跨膜离子及小分子物质可通过 心肌细胞的缝隙连接直接交换, 心肌细胞的缝隙连接在维持正常的心脏节律和细胞间 的代谢物交换方面扮演着重要角色。由于整体心脏中心肌细胞间存在缝隙连接，小分 子物质通过缝隙连接顺着电化学梯度在心肌细胞间传递，从而减少了心肌细胞间的电 生理异质性。在整体心脏中，由于心肌细胞间良好的缝隙连接耦连，使得跨室壁复极 的差异小于单个心肌细胞间动作电位时程的差异。近来有研究结果显示，在正常和心 衰的心脏中，缝隙连接蛋白 Cx43 的表达、分布和磷酸化均影响了跨室壁复极的异质 性。缝隙连接蛋白磷酸化状态的改变可影响缝隙连接通道的开放和代谢，造成缝隙连 接的解耦连和功能下降。Carbenoxolone（缝隙连接解耦连剂）可增加复极离散度，而 增加各层心肌细胞间缝隙连接的耦连，可减少跨室壁复极时程的差异。缝隙连接耦连 增强剂抗心律失常肽 AAP10 和 HP-5 能够增加缝隙连接功能，进而减少动作电位时程 的离散度。增加心肌细胞间缝隙连接的耦连，可以防止病理状态跨室壁复极离散度的 异常增加。 心肌肥厚和心衰等多种心脏疾病的跨室壁复极离散度增加，同时其伴有心肌细胞 间缝隙连接失耦连。这些研究结果表明改变心肌细胞间缝隙连接耦连，可能影响心脏 各层心肌细胞间复极特性的差异的大小。因而我们推测增加心脏心肌细胞间缝隙连接 的耦连，可以减少跨室壁复极离散度，进而预防长 QT 综合征室性心律失常的发生。 本研究检测了缝隙连接激动剂抗心律失常肽(AAP10)对兔 LQT3 和犬 LQT2 模型跨室 壁复极离散度和室性心律失常的影响并探讨其作用机制。 第一部分 抗心律失常肽对兔 LQT3 模型缝隙连接耦连和 室性心律失常的影响 目的：跨室壁复极离散度（transmural dispersion of repolarization，TDR）的增加 可导致长 QT 综合征心律失常的发生。心肌细胞的缝隙连接也参与了跨室壁复极离散 度的形成和维持。本实验研究了缝隙连接激动剂抗心律失常肽(AAP10)，对兔 LQT3 模型缝隙连接磷酸化，以及室性心律失常的影响并探讨其作用机制。 方法：心肌细胞钠通道开放剂海葵毒素 ATX-II (20 nM, Calbiochem Corp., La Jolla, CA, USA)和兔左室楔型心肌块用于建立 LQT3 模型。抗心律失常肽 AAP10 (缝隙连接 激动剂，Chinese Peptide Co., Hangzhou, Zhejiang, China) 用于增加心肌细胞间缝隙连 接耦连。采用浮置玻璃微电极法，同步记录心外膜、心内膜心肌细胞跨膜动作电位， 同时记录跨室壁心电图。免疫印迹法（Western blot）检测心肌细胞缝隙连接蛋白 43 (Connexin43 , Cx43)去磷酸化水平的变化。 基础步长 1000 m