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肝脏NK细胞对梗阻性黄疸小鼠模型 急性肝损伤及肝纤维化的影响-肝胆胰腺外科学专业论文.docx

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肝脏NK细胞对梗阻性黄疸小鼠模型 急性肝损伤及肝纤维化的影响-肝胆胰腺外科学专业论文

万方数据 万方数据 原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者: 日期: 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者: 日期: 年 月 日 摘要 摘要 肝脏 NK 细胞对梗阻性黄疸小鼠模型急性肝损伤及肝 纤维化的影响 研究生 陈 琳 导 师 张宏伟 教授 郑州大学人民医院 肝胆胰腺外科 河南 郑州 450003 摘要 前言 梗阻性黄疸(obstructive jaundice, OJ)是临床上常见病理状态,主要导致肝 脏损伤,随着梗阻时间延长,肝脏最终发展为胆汁淤积性肝硬化。目前对梗阻性 黄疸急性肝损伤及肝纤维化治疗措施有限,因此研究其肝损伤的发病机制对治 疗有重要意义。 自然杀伤(natural killer,NK)细胞在肝脏中含量丰富,是肝脏免疫的第一 道防线。相比外周血液中的 NK 细胞,肝脏 NK 细胞除了固有免疫功能外还有特 殊的功能,很多研究发现肝脏 NK 细胞在多种肝脏疾病中功能失调并参与肝脏疾 病肝损伤。研究证实活化的 NK 细胞可通过直接杀伤肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)及通过产生细胞因子 IFN-γ 抑制肝纤维化。目前关于肝脏 NK 细胞在 梗阻性黄疸肝损伤及肝纤维化中的作用研究较少。 目的 本实验拟通过构建梗阻性黄疸小鼠模型,研究肝脏 NK 细胞对梗阻性黄疸小 鼠模型急性肝损伤及肝纤维化的影响,并初步探讨其相关机制。 I 方法 小鼠随机分为 4 组,每组 40 只,A 组:手术+Poly I:C 组、B 组:手术+PBS 组、C 组:假手术+Poly I:C 组、D 组:假手术+PBS 组。手术组行胆总管双重结 扎术(bile duct ligation, BDL)构建梗阻性黄疸模型,假手术组仅游离胆总管。 A、C 组腹腔注射聚肌胞(Poly I:C)诱导 NK 细胞肝内活化及聚集,B、D 组注 射等量磷酸盐缓冲液(PBS)作为对照。于第 7 天及第 14 天两个时相取各组小 鼠血液及肝脏标本,比较各组小鼠血清肝功能各指标、肝组织 HE 染色、Masson 三染色、NF-κB 免疫染色、α-SMA 免疫染色及实时荧光定量聚合链反应检测肝 脏 NK 细胞表面特异性标志 NK1.1、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)、 NF-κB、α-SMA 及肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA 表达量变化,观察梗阻性黄 疸模型病理生理过程,对比各组急性肝损伤及肝纤维化的程度,探究肝脏 NK 细 胞及与急性肝损伤及肝纤维化的关系。 结果 胆总管结扎术成功构建了小鼠梗阻性黄疸模型,术后第 7 天以急性肝损伤 为主要表现,血清肝功能指标升高,肝质比升高,肝脏呈淤胆表现,肝脏出现 大量片状坏死,Kuffer 细胞活化产生大量 TNF-α,NF-κB 活化增多,NK1.1、TRAIL mRNA 表达增多。第 14 天模型组小鼠肝脏肝损伤加重,并出现明显的肝硬化表 现,同时,第 14 天肝脏 NK1.1 阳性细胞及 TRAIL 表达较第 7 天增多,与肝损 伤呈正相关,推断 NK 细胞出现免疫紊乱,NK 细胞可能参与梗阻性黄疸肝损伤。 与 PBS 对照组比较,Poly I:C 干预组肝脏 NK 细胞数量增多,表明 Poly I:C 成功 诱导 NK 细胞肝内聚集;手术组 A 组和 B 组比较,第 7 天肝功能指标谷丙转氨 酶(ALT)、谷草转氨酶(AST) A 组较 B 组升高,HE 染色肝细胞坏死面积 A 组较 B 组增大,NF-κB 及 TNF-α 表达增高,TRAIL 表达增高,差异均有统计学 意义(P<0.05);第 14 血清肝功能 AST、ALT 及 TNF-α 表达 A 组较 B 组高, HE 染色、Masson 染色结果表明 A 组较 B 组肝纤维化程度重,肝脏 α-SMA 表达 A 组较 B 组增多,差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组 C 组和 D 组比较, 第

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