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酶法提取蝉拟青霉多糖研究 　　摘要:用正交优化的方法分别研究木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶对蝉拟青霉多糖得率的影响。结果表明,木瓜蛋白酶法提取的多糖产量最高,其最佳提取条件是:温度50 ℃、pH7、木瓜蛋白酶1%、酶作用时间2 h。 　　关键词:蝉拟青霉;多糖;木瓜蛋白酶;纤维素酶;果胶酶;正交优化 　　中图分类号:Q93-335文献标识码:A DOI编码:10.3969/j.issn.1006-6500.2010.02.011 　　 　　Study on the Enzyme-extraction Method of Polysaccharide from Paecilomyce cicadae 　　LIU Yun1, TAN Ai-juan1, LV Shi-ming2 　　(1.College of Life Sciences,Guizhou University,Guiyang, Guizhou 550025,China;2.College of Animal Sciences, Guizhou University, Guiyang, Guizhou 550025,China) 　　Abstract:Effects of papain, cellulase and pectase on extraction rate of polysaccharide from Paecilomyce were determined in orthogonal test. The results showed that the polysaccharide content extracted by papain was the highest among three enzyme-extraction method, and its optimal extraction conditions were 1 % papain, 50 ℃ and pH 7, 2 h with papain treating. 　　Key words: Paecilomyce;polysaccharide;papain;cellulose;pectase;othognoal optimization 　　 　　蝉花是一些蝉的土栖若虫受到蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)等真菌寄生的产物,是中国三大名贵药用虫草之一。陈祝安[1]和刘广玉等[2]证明,蝉拟青霉及人工培养物有明显的镇痛、镇静和解热等功效,且其作用与天然蝉花和冬虫夏草(Cordyceps)相似 。金丽琴[3]、陈秀芳等[4]证明,蝉拟青霉能激活大鼠腹腔与肺泡巨噬细胞,具有增强大鼠免疫能力、改善脂类物质代谢和保护脏器组织的作用。作为名贵中药材蝉花的无性型,蝉拟青霉发酵菌丝体含有天然蝉花相似的各种化学成分,而且其主要活性成分多糖的含量明显高于天然蝉花[5],因而蝉拟青霉发酵菌丝体可以替代天然蝉花用于医药和滋补保健品。 　　笔者以热水浸提方法为基础,比较木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶对提取蝉拟青霉菌丝体多糖得率的影响,以优化蝉拟青霉多糖的提取工艺。 　　 　　1材料和方法 　　 　　1.1试验材料 　　1.1.1菌株蝉拟青霉GZDXIFR 4718菌株,采自贵州省梵净山自然保护区,由贵州大学真菌资源研究所分离、鉴定、保存。 　　1.1.2培养基斜面培养基:马铃薯200 g切块,用水煮沸30 min,加蔗糖20 g、琼脂20 g、蛋白胨0.5 g,水补足1 000 mL,pH自然。液体培养基:葡萄糖20 g,酵母膏5 g,K2HPO4 1 g/L,水补足1 000 mL,pH6.5。 　　1.1.3主要试剂木瓜蛋白酶(2 000 μg)、纤维素酶(60 000 μg)、果胶酶(40 μg):均为上海谱振生物技术有限公司产品。苯酚、浓硫酸、盐酸、氢氧化钠、葡萄糖、蛋白胨、K2HPO4、乙醇、丙酮、氯仿、正丁醇等均为分析纯试剂。 　　1.1.4主要实验仪器灭菌锅、分光光度计、旋转蒸发仪、摇床、恒温培养箱、烘箱、微量移液器、电子天平、旋涡混合器、人工培养箱等。 　　1.2方法 　　1.2.1菌丝体制备将蝉拟青霉(GZDXIFR 4718)菌株活化,经过固体斜面培养、液体种子培养、液体发酵培养,离心,收集湿菌丝体,50 ℃烘干至恒质量,粉碎。 　　1.2 2多糖含量测定(1)标准曲线的绘制。称取干燥至恒质量的葡萄糖 99.5 mg,定容至100 mL,吸取6 mL转移至50 mL 容量瓶定容,即得 0.119 4 mg/mL的标准品溶液。精确吸取标准品溶液 0,0.2,0.6,1.0,1.4,1.8,2.0 mL,补蒸馏水至2 mL,再分别加 1 m