酿酒酵母与拟南芥Ｐｒｅ－ｍＲＮＡ剪接位点比较.docVIP

酿酒酵母与拟南芥Ｐｒｅ－ｍＲＮＡ剪接位点比较 　　摘要：RNA 剪接是一个多步骤、形成多种中间状态复合物的复杂过程。跨物种的基因表达更显得复杂，RNA剪接是基因表达调控中重要的步骤。这里讨论酵母和植物的剪接位点保守序列的差异，指出可能对植物基因在酵母中表达有重要作用的顺式作用元件。 　　关键词：RNA剪接；剪接体；剪接因子；跨物种表达；剪接位点 　　 　　酿酒酵母细胞繁殖快，操作简便，属于真核模式生物。将植物的基因放入酵母中表达，在于能用酵母细胞大量表达植物蛋白。在2002年有一篇论文关于植物mRNA前体在裂殖酵母中的剪接和1983年的跨物种基因表达的研究。[1] 　　RNA剪接(RNA splicing)是tRNA、rRNA，特别是mRNA加工与成熟的重要生物学过程，也是蛋白质分子多样性产生的关键机制之一，在基因表达调控中扮演着重要的角色[2]。RNA剪接需要多种因子参与， 包括杂性核RNA(heterogeneous nuclear I A，hnRNA)结合蛋白hnRNP(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein)、小型核RNA (small nuclear RNA，snRNA)结合蛋白snRNP(small nuclear ribonucleoprotein)等。核pre-mRNAs 剪接由剪接体执行，剪接体包含有5种（U1,U2,U4/6,和U5）snRNPs和其他non-snRNP剪接因子。[3]在真核细胞内，RNA原初转录物的分子很大，通过剪接产生成熟的mRNA分子． 　　 　　1Pre-RNA剪接反应机制概述 　　 　　真核生物细胞核基因初始转录物(pre-mRNA)剪接由两步连续进行的转酯反应完成(Padgett，1984Ruskin，1984)。首先，分支位点(branch site)处的腺苷酸2’羟基亲核攻击5’剪接位点的3’一5’磷酸二酯键，产生两种剪接中间体分子：一为5’外显子对应的线性RNA分子；一为由内含子5’一端鸟苷酸与分支点腺苷酸之间通过2’一5’磷酸二酯键形成的套索状分子，该分子包含了内含子和3’外显子序列。紧接着5’一外显子的3’羟基攻击3’剪接位点的磷酸二酯键，去除套索状结构的内含子序列，同时将相邻的两个外显子连接起来[4]。 　　 　　2剪接体组装中的内含子和外显子的界定 　　 　　U1snRNP结合上5’剪接位点SF1结合到分支区域促使U2AF结合到聚嘧啶区域和3’剪接位点上，导致早期复合体的形成（E complex）。在A复合体中U2snRNP和mRNA 前体形成稳定的snRNA-branch-region duplex。U4-U5-U6 3snRNP结合到A复合体上产生C复合体，一个成熟的剪接体。（1）内含子界定：mRNA 前体含有1个内含子和2个外显子，在E复合体上的剪接因子结合在剪接位点上跨过内含子。（2）外显子界定：在mRNA 前体中含有多个内含子和外显子，E复合体中的剪接因子结合在剪接位点上在外显子定义的早期复合体上（EDE complex）,随后形成了A复合体（EDA complex），在组装成熟剪接体的过程中有一个内含子界定的复合体的过渡[5]。 　　 　　3剪接体的组装过程 　　 　　mRNA 前体原始转录物被蛋白（hnRNP Proteins;putative AU-biding proteins in plants）结合上,这类蛋白中的一些可能会结合上特殊的序列或者结合剪接因子.U1snRNP 和蛋白的相互作用（比如U2AF）形成一个复合体。结合U2 snRNP形成剪接体的前体，再结合上U4/U6-U5就形成了剪接体。随着这个复合体一系列的RNA-RNA间的相互作用和重组的改变，剪接反应发生了。剪接后，间接产物和剪接后复合体被释放，内含子被降解，剪接体结合在内含子上而后进入新的一轮循环中[6]。 　　 　　4mRNA前体剪接因子 　　 　　4.1 SR蛋白 　　SR蛋白家族是近些年来为人们广泛关注的一类剪接因子，它在剪接复合体的聚集形成，以及剪接因子在mRNA前体链上结合位点的识别过程中起着关键作用。其成员包括SC35(spliesome component of 35kD)、SF2/ASF(splicing factor 2/alternative splicing factor)、SRP20、SRP30、SRP40、SRP55和SRP70等。SR 家 族 剪接因子的结构特点是氨基酸序列中富含丝氨酸一精氨酸残基。其中RNA结合结构域(RNA binding domain)位于氨基末端(N末端)，具有结合RNA的能力。而位于竣基末端的是含不同丝氨酸和精氨酸残基数量的RS 结构域(R