高产江西烯酮酯发酵条件及超高效液质联用定量检测的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

遵义医学院硕士学位论文刘元元 遵义医学院硕士学位论文 刘元元 万方数据 万方数据 高产江西烯酮酯的发酵条件及超高效液质联用定量检测的研究* 摘 要 目的：通过金属盐添加优化其发酵培养条件，提高江西烯酮酯的产量；优化江西 虫草抗肿瘤活性次生代谢产物江西烯酮酯的超声波辅助提取条件，并建立其超高效液 相色谱-三重四级杆质谱联用定量检测方法。 方法：考察不同金属盐对江西烯酮酯产量的影响，筛选出效果最好的金属盐，然 后通过对添加时间、添加浓度等进行优化，确定最适发酵条件，提高江西烯酮酯的产 量；采用四因素三水平正交试验，对超声波辅助提取江西烯酮酯的提取溶剂（A）、 液料比（B）、提取次数（C）及提取时间（D）进行优化；采用超高效液相色谱-三 重四级杆质谱联用（UPLC-MS/MS），多反应监测（MRM）模式，建立了江西烯酮 酯的定量检测方法。 结果：通过筛选，硫酸亚铁提高江西烯酮酯产量的效果最为明显，对其添加时间 和浓度进行优化，证明在第 8 天添加 4.8 mM 硫酸亚铁可使江西烯酮酯产量达到 376.92 ±15.33 μg/g，是对照组产量的 3.40 倍；最佳超声波辅助提取条件为 20 倍量水饱和正 丁醇提取 2 次，每次 60 min；液质联用定量检测方法在 0.49 ng/mL~125 ng/mL 内线 性关系良好（R = 0.9994），方法定量限为 0.49 ng/mL，检测限为 0.25 ng/mL，回收 率在 95.1%~100.1%之间，相对标准偏差在 5.05%~7.87%之间。 结论：证明硫酸亚铁添加能够有效提高江西烯酮酯的产量，此方法操作简便有效， 成本低，便于大规模生产；采用超声波辅助萃取-超高效液相色谱-三重四级杆质谱联 用的方法，对江西烯酮酯进行提取及定量检测，该方法定性定量准确、灵敏度高、重 复性好，能够满足江西烯酮酯定量分析的需要。 关键词：江西虫草 江西烯酮酯 超声波辅助提取 超高效液相色谱-三重四级杆质 谱 铁盐 发酵条件优化 *资助基金来源：国家自然科学基金（No.；教育部新世纪优秀人才支持计划（No.NCET-10-0100）；贵 州省社会发展―十一五‖攻关项目（黔科合 SZ 字[2009] 3048）。 2 Study the fermentation conditions of the high production of Jiangxienone and its quantitative detection by UPLC-MS/MS Abstract Objective:Enhancing the content of Jiangxienone by the addition of ion salt and optimizing its fermentation conditions. In addition, to optimize condition of ultrasonic-assist on extraction technology of Jiangxienone from Cordyceps jiangxiensis, and to establish a quantitative detection method of Jiangxienone by UPLC-MS/MS. Methods: The ultrasonic-assist on extraction technology was optimized by an orthogonal array experiment. A three-level L9 (34) orthogonal array design was used to optimizate the factors which may affect the extract ratio: (A) extraction solvent; (B) solvent volume; (C) extraction cycle and (D) extraction time. Establishing a quantitative detection method of Jiangxienone by UPLC-MS/MS. Study on the effects of different metal salts on cell growth and content of Jiangxienone in the flask. Enhancing the yield of Jiangxienone by optimizing the addition time and does of metal salt to attain a hig