高产洛伐他汀红曲霉菌诱变育种及其在酱油废水中的应用-生物医学工程专业论文.docxVIP

湖南工业大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进 行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全 意识到本声明的法律结果由本人承担。 作者签名： 日期： 年 月 日 湖南工业大学论文版权使用授权书 本人了解湖南工业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论 文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其他手段保存学位论文； 学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。 作者签名： 导师签名： 日期： 年 月 日 I I 摘 要 自从发现红色红曲霉菌（M.ruber）产生强降胆固醇物质洛伐他 汀之后，国内外学者掀起了降脂红曲霉菌的研究热潮。目前洛伐他汀 的研究主要集中在洛伐他汀的合成基因、发酵工艺的优化以及高产菌 种选育等方面。很少涉及有关发酵基质替代方面的研究，酱油废水中 含有丰富的氮源，能被微生物充分利用。因此，利用酱油废水生产洛 伐他汀具有一定的社会与经济意义。 本研究主要通过氯化锂诱变筛选高产洛伐他汀的红曲霉菌株；研 究此菌株高产洛伐他汀的发酵条件及其工艺参数；通过驯化此菌株研 究其利用酱油废水生产洛伐他汀的影响因素。其结果如下： 对实验室保存的红曲霉菌株进行氯化锂诱变，最终筛选出六株有 较好正突变的菌株。其中三株正突变株的产洛伐他汀能力大大提高， 比出发菌株分别提高了 214%（HW3）、239%（HW5）、169%（HW6）。 菌株 HW2、HW3 和 HW5 的遗传稳定性相对较好。在驯化实验中发 现，菌株 HW2 在酱油废水中表现较强适应能力，且生产洛伐他汀的 性能较好。 目前洛伐他汀含量检测的方法主要为 HLPC，其检测过程复杂、 耗时，不能直观的检测到高产红曲霉菌株。而红曲霉菌发酵生产洛伐 他汀的过程中往往伴随红曲色素的生产。因此，研究红曲色素和洛伐 他汀两者之间的相关性，能简便筛选出高产洛伐他汀的红曲霉菌。本 研究结果表明，培养基中无论是碳源还是氮源，其色价与洛伐他汀产 量之间具有良好的正相关性，其相关系数均达到 0.91 以上。 通过单因素实验和正价实验获得了 HW2 摇瓶发酵的最佳工艺条 件：转速 180r/min、6%蔗糖、4%大豆粉、0.5%乙酸钠、温度 28℃， 最优发酵条件下洛伐他汀的产量为 71.48 mg/L，较初始含量（24.84 mg/L）提高了 288%。 研究了菌株 HW2 以酱油废水替代基本培养基中的氮源，生产洛 伐他汀的发酵因素的影响。以添加质量分数为 6%蔗糖的碳源，生产 洛伐他汀的量较高；酱油废水的保存方式和时间对洛伐他汀的合成也 有较大影响，以 4℃中，时间不超过 1.5 月的酱油废水生产洛伐他汀 的量最好。 关键词： 红曲霉菌，洛伐他汀，氯化锂诱变，酱油废水，发酵工艺 II II Abstract Since found that M.rubber could produce lovastatin, which is cholesterol synthesizing inhibitor, researchers both in china and abroad had been making study of it. Now researchs of lovastatin focused on biosynthetic pathway, optimization of fermentation and the high-yielding strain breeding. There were rarely researchs involved in the study of the substituted substrate in fermentation. The soy sauce wastewater could be used by microorganism because of abundant nitrogen source. Therefore, the production of lovastatin using soy sauce wastewater had a certain social and economic significance. In this study, LiCl mutation breading was conducted for increasing the production of lovastatin. The fermentation condition，the process