高分化胰腺癌多药耐药机制及靶向逆转的初步研究-外科学(肝胆)专业论文.docxVIP

第三军医大学博士研究生论文高分化胰腺癌多药耐药机制及靶向逆转的初步研究 第三军医大学博士研究生论文 高分化胰腺癌多药耐药机制及靶向逆转的初步研究 一、三种多药耐药膜转运蛋白和IGF．I R在高分化胰腺癌组织中的差异性表达及 意义 二、IGF．I R反义寡核苷酸对SWl990胰腺癌细胞株MRP调节作用的研究 三、IGF-I R反义寡核苷酸转染对SWl990胰腺癌细胞株化疗敏感性的影响 摘 要 目的：从多药耐药膜转运蛋白角度探讨高分化胰腺癌的耐药及调控机制；研究阻 断体外培养的人高分化胰腺癌细胞株SWl990 IGF．I R环路对多药耐药蛋白MRP表达 的调节作用；评价IGF．I R反义寡核苷酸转染对SWl990胰腺癌细胞株化疗敏感性的 影响。 方法：1、收集2000．4．2001．12月间四家医院的高分化胰腺癌手术切除病理标本 26例，每个标本作连续切片，采用免疫组化SP法分别检测三种多药耐药膜转运蛋白 P-gP、MRP、LRP和IGF．I R在胰腺癌组织和癌周组织中的表达，并作对比研究和相 关性分析；2、采用自行设计的混合骨架IGF．I R反义寡核苷酸，在非脂质体配方的 FugeneⅢ6试剂介导下转染体外培养指数期生长的高分化胰腺癌细胞株SWl990，在转 染后12、24、48、72、96小时连续观测IGF．I R的水平变化，了解该序列IGF．I R 反义寡核苷酸对IGF．I R表达的干预效果；同时，免疫组化、Wester．blot和RT-PCR 检测转染对MRP在蛋白和mRNA水平表达的影响。3、在前面研究的基础上，采用不 同剂量IGF-I R反义寡核苷酸转染SWl990细胞，高效液相色谱仪比较转染前后5． 氟脲嘧啶、丝裂霉素、Gemcitabine三种不同结构化疗药物在细胞内蓄积浓度的变化； 四氮唑蓝法、流式细胞仪和AO荧光染色检测转染联合化疗对胰腺癌细胞杀伤效应、 细胞周期和凋亡易感性的影响。设立空白转染、DMEM假转染和IGF．I R正义寡核苷 酸转染作为对照组。 结果：1．1、在高分化胰腺癌组织中，三种多药耐药膜转运蛋白呈差异性表达： MRP最高(76．9％)，P．gP次之(42．3％)，LRP仅7．69％；而癌旁组织中，其表达亦 不均衡：P．gp为34．6％，MRP7．69％，LRP未检测到表达；MRP在胰腺癌组织中的表 达显著高于癌旁组织(P0．05)，但P—gp和LI P在胰腺癌和癌旁组织的表达则无明显 差异(P0．05)：1．2、IGF．I R在高分化胰腺癌组织中过度表达(73．1％)，而在癌周 基本不表达，相关分析显示，IGF．I R与MIP在高分化胰腺癌组织中的表达明显正相 VTI 第三军医大学博士研究嶷论文关(rs=0．71l，P0．02)。2．1、体外培养的sWl990胰腺癌细胞呈典拟的上皮样细胞生 第三军医大学博士研究嶷论文 关(rs=0．71l，P0．02)。2．1、体外培养的sWl990胰腺癌细胞呈典拟的上皮样细胞生 长特征，搿袭达IGF-I R和MRP，免疫组化显示袭达部位主要位于细胞的胞浆和胞膜， 面部分腮梭也可着色；2．2、IGF-l R反义寡核蛰黢转染蜃，SWl990黢腺癌细胞鲍IGF。 l R在蛋巍秘mRNA零警均赘嚣下海，与辩照缀鞠魄差吴显著(p妁。05)：兔疫筑纯 显示IGF-I R蛋白的阳性表述奄在空白对照组为84．2％，转染后i2、24、48、72、96 小时分别为51．3％、22．6％、19．7％、38．8％和62．4％：RT-PCR显示备时相点IGF．I R mRNA的袭达量分别是空白对照组SWl990胰腺癌细胞表达水平的60．6％、34．2％、 26．3％、45．8％秘76．5％；2．3、IGF-l R反义寡核静酸能显著下调SWl990胰腺癌细胞 MRP在鬃纛_稳mRNA承乎戆袭这(P固．05)，显譬IGF．1交交往褒箨一致：在转染12、 24、48、72、96小时，MRP的袭达量分别是空翻转染组的83。6％、52。6％、3913％、 62．6％和91．8％(免疫组化Sp)；58．3％、38．6％、29．5％、54．4％和81．1％(Wjstem．blot)； 52．6％、30．9％、25．5％、48．3％和76．8％(RT—PC捷)。3．1、IGF-I R反义璨核苷酸能明显 提高化疗魏物在SWl990胰腺癌缨胞内的蓄积浓度，与对照组比较麓辩恩著(Po。05)， 蓄黩浓度熬爱义寡核营酸转絷麓蠹夔秀裹瑟缮麓；3．2、摹缝IGF．1疑反义寡孩萤酸转 染对SWl990胰艨癌细稳霄低水平的杀伤效应，褥转染联合纯疗对jl申瘸细胞的杀伤俸 用明显增强，显著高于单纯化疗组和转染组(PO．05)，并分别随转染剂景和化疗给药 浓度的增加而增强：3．3、流