ecn肝素前体多的合成调控研究-食品科学专业毕业论文.docxVIP

合肥工业大学本论文经答辩委员会全体委员审查，确认符合合肥工业 合肥工业大学 本论文经答辩委员会全体委员审查，确认符合合肥工业 大学学历硕士学位论文质量要求。 答辩委员会签名(工作单位、职称、姓名) 主席：安徽省农业科学院农产品加工研究所，研究员日眵譬 委员：合肥工业大学，教授 宇辫 合肥工业大学，教授 √芝7与 ， 合肥工业大学，教授 、趁◇肇 合肥工业大学，副教授 叶多以 导师：合肥工业大学，教授 ／，邪吁 l 万方数据 学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行独立研究工作所取 学位论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行独立研究工作所取 得的成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的内容外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得金旦巴王些盍堂或其他教育机构 的学位或证书而使用过的材料。对本文成果做出贡献的个人和集体，本人已在论文 中作了明确的说明，并表示谢意。 学位论文中表达的观点纯属作者本人观点，与合肥工业大学无关。 学位论文作者签名：锨会慈 签名目期：∞“年哞月阳日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解金目曼王些太堂有关保留、使用学位论文的规定， 即：除保密期内的涉密学位论文外，学校有权保存并向国家有关部门或机构送交论 文的复印件和电子光盘，允许论文被查阅或借阅。本人授权 金月墨王些太堂可以 将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库，允许采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：荔胎慈 指导教师签名： 《 胗勿 钇 签名日期： --弦lb年年月如日 签名日期： ／年 n弋月； 日彳j 论文作者毕业去向 工作单位： 联系电话：／夕岁lI力矽乃 E．mail：(Ph以h。7牛@，“·∞川 通讯地址：善捷哟倌膨祧决硌粥邮政编码：玛啪了 万方数据 致谢本论文工作是在我的导师周贤轩教授的悉心指导下完成的，从论文的选题、 致谢 本论文工作是在我的导师周贤轩教授的悉心指导下完成的，从论文的选题、 修改、开题直至写作的时间里，老师都悉心指导，并一直保持最耐心的态度，这 一切都深深的影响着我，也使得我的研究可以在他的指导下得以完成。周老师手 把手教我实验技能，引导我独立自主解决所遇到的问题，老师丰富的理论知识和 实践经验让我从刚接触生物研究到熟练掌握研究方法，开拓了我的视野，使我的 科研能力有了很大提高。在生活上，周老师经常主动找我交流了解我的情况，及 时帮我解决所遇到的困难。借此机会，向周老师表示衷心地感谢。 在三年的研究生期间，中科大赵丽萍老师在EMSA实验中对我耐心指导，帮 助我完成这一实验。同实验室的包斐斐、于晏璎、唐家钦、赵龙、安翠英也给我 在生活和科研学习中提供了很多帮助，在此对大家表示感谢。 此外，我还得到了食品科学与工程学院各位领导以及各位老师的帮助，在生 活和学习上也到学院各位同学的关心和帮助，在此向他们致以诚挚的谢意。 最后，我要感谢我的父母对我读研的支持，没有他们的鼓励，就没有我现在 的进步，对我的父母表示诚挚的感谢。 作者：颜会慧 2016年3月24日 万方数据 摘 摘 要 肝素是一种使用广泛的临床抗凝血药物，由于“肝素钠污染事件”，人们对 动物源性肝素的安全性表示担忧。化学酶法合成型肝素为肝素提供了另一种来源， 以肝素前体为初始碳骨架，通过多种酶的作用合成出有活性的肝素。肝素前体是 益生大肠杆菌Nissle 1917(EcN)胞外荚膜多糖的成分，可以抑制致病菌对肠道 的粘附，调节肠道微生物的组成。EcN利用荚膜多糖在肠道中定植，通过多种调 节系统与食源性肠道致病菌竞争来治疗肠道疾病。最近研究表明碳源会影响肝素 前体合成的产量，然而碳源控制肝素前体合成的机制尚不明确。本论文通过启动 子表达分析、凝胶缓滞实验(EMSA)、核磁共振(NMR)分析等技术手段，研 究肝素前体合成受碳源调控的机制。我们发现肝素前体的生物合成受葡萄糖抑制， 而添加果糖或甘露糖为碳源会增加肝素前体的产量。通过基因水平研究，确定了 环腺苷酸．环腺苷酸受体蛋白(cAMP．CRP)复合物结合在肝素前体基因簇 region3启动子的CRP结合位点上，并激活肝素前体基因簇的转录，突变CRP结 合位点后启动子无法转录。用1H NMR分析技术确定了EcN肝素前体多糖的结构， 并定量胞外肝素前体的产量。添加葡萄糖为唯一碳源肝素前体产量为5mg／L，该 肝素前体产量水平低于以果糖(13mg／L)或甘露糖(10mg／L)为唯一碳源的肝素 前体产量。本研究结果对肝素前体生物合成的调控机理进行了补充，并有利于肝 素前体的合成与制备。 关键词：肝素前体；cAMP．CRP；荚膜多糖：Nissle 1917