华蟾素在对小鼠系统性白念珠菌感染中 免疫调节作用的研究-中医外科专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 湖北中医药大学学位论文原创性声明 本人声明： 所呈交的学位论文是在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已 经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖北中医药大学或其他单位的学位或 证书而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中作了明 确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 年 月 日 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解湖北中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权 保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部份 内容，可以采用复印、缩印或其他手段保留学位论文；学校可以根据国家或湖北省 有关部门的规定送交学位论文。同意《中国优秀博硕士论文全文数据库出版章程》 的内容。同意授权中国科学技术信息研究所将本人学位论文收录到《中国学位论文 全文数据库》。 （保密论文在解密后遵守此规定） 论文作者签名： 导师签名： 年 月 日 目录 目 录 万方数据 万方数据 HYPERLINK \l _bookmark0 中文摘要 I HYPERLINK \l _bookmark1 ABSTRACT III 缩略词表 Ⅵ HYPERLINK \l _bookmark2 前 言 VII HYPERLINK \l _bookmark3 材料与方法 1 HYPERLINK \l _bookmark4 一、动物 1 HYPERLINK \l _bookmark5 二、试剂与仪器 1 HYPERLINK \l _bookmark6 三、实验方法 3 HYPERLINK \l _bookmark7 结 果 8 HYPERLINK \l _bookmark8 .不同浓度华蟾素对小鼠腹腔激活巨噬细胞抗白念珠菌活性的影响 . 8 HYPERLINK \l _bookmark9 .华蟾素对小鼠腹腔激活巨噬细胞 TNF-Α 分泌水平的影响 9 HYPERLINK \l _bookmark10 .华蟾素对小鼠腹腔巨噬细胞 NO 分泌水平的影响 9 HYPERLINK \l _bookmark11 4.细胞活力检测结果 10 HYPERLINK \l _bookmark12 讨 论 15 HYPERLINK \l _bookmark13 结 语 24 HYPERLINK \l _bookmark14 参考文献 25 HYPERLINK \l _bookmark15 文献综述 277 HYPERLINK \l _bookmark16 致 谢 399 中文摘要 中文摘要 万方数据 万方数据 万方数据 万方数据 【目的】观察华蟾素对小鼠腹腔激活巨噬细胞（Mφ）体外抗白念珠菌活 性的影响及其机制，以探讨华蟾素在体外抗白念感染中的作用，同时探 讨华蟾素在体内抗小鼠系统性白念珠菌感染中的作用，为其临床抗白念 感染的应用提供实验依据。 【方法】第一部分体外实验：1.分离纯化小鼠腹腔巨噬细胞，用脂多糖 （LPS）激活，与不同浓度华蟾素共同培养 24h，弃上清，再与一定浓度 的白念珠菌共同培养 4h。收集 Mφ 培养液上清用于细胞因子活性测定， 细胞用于吞噬活性杀伤功能检测。2.用平皿稀释法测定每毫升白念珠菌 菌落形成单位（CFU/ml），以检测华蟾素对 Mφ 吞噬杀伤白念的影响。3. 用酶联免疫吸附（ELISA）法测定细胞培养上清液中 TNF-α 浓度，以检 测华蟾素对激活 Mφ 分泌 TNF-α 的影响。4.以 Griess 法测定培养细胞 上清液中一氧化氮（NO）的浓度，以检测华蟾素对激活 Mφ 分泌 NO 的影 响。第二部分体内实验：① 建立用环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠系统性 白念珠菌感染动物模型，设立处理组（白念珠菌感染前注射华蟾素）和 对照组（白念珠菌感染前注射等剂量无菌 PBS）。② 在白念珠菌感染第 2 天、第 3 天、第 7 天，用平皿稀释法检测处理组和对照组小鼠肾、脾 组织菌落形成单位（CFU）的数目，通过对比来评估华蟾素抗白念珠菌活 性。③ 小鼠感染第 2 天、第 3 天、第 7 天制作肾、脾组织病理学标本， 评估真菌感染情况。④ 通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对比两组小鼠感 染第 2 天、第 3 天、第 7 天脾干扰素 γ 分泌水平，以此探求华蟾素在对 小鼠系统性白念珠菌感染中免疫调节作免疫防护中作用的机制。 【结果】 1. 当华蟾素的浓度为 0.2mg/mL 及 0.4mg/mL 时，其白念生长 抑制率分别为 35.6%、38.5%，与单纯巨噬细胞对照组（抑制率 28.4%） 比较差异有显著性（P0.05）