蛋白质工程制药1.ppt

蛋白质工程制药;主要内容;概述;;蛋白类药物的种类;一 蛋白质工程的研究内容： 1 利用已知的蛋白质一级结构的信息开发应用研究。 2 定量确定蛋白质结构-功能关系。这是目前蛋白质工程研究的主体，它包括蛋白质三维结构模型的建立，酶催化的性质、蛋白质折叠和稳定性研究等. 3 从混杂变异体库中筛选具有特定结构-功能关系的蛋白质。 4 根据已知结构-功能关系的蛋白质，用人工方法合成它及其变异体. ;;;三 蛋白质工程的改造策略;;;第二节、蛋白质的分子改造 ;;;;（1）M13-DNA寡聚核苷酸介导诱变技术? ;;（2）?寡核苷酸介导的PCR诱变技术 ;过程： 将目的基因克隆到质粒载体上，质粒分置于两管中，每管各加入两个特定的PCR引物，一个引物与基因内部或其附近的一段序列完全互补，另一引物和另一段序列互补，但有一个核苷酸发生了突变； 两管中，不完全配对的引物与两条相反的链结合，即两个突变引物是互补的。由于两个反应中引物的位置不同，所以PCR扩增后，产物有不同的末端。 将两管PCR产物混合、变性、复性，则每条链会与另一管中的互补链退火，形成有两个切口的环状DNA，转入大肠杆菌后，这两个切口均可被修复。若同一管子中的两条DNA链结合，会形成线性DNA分子，它不能在大肠杆菌中稳定存在，只有环状DNA才能在大肠杆菌中稳定存在，而绝大多数的环状分子都含有突变基因。;;（3）盒式突变技术 ;;;;二、蛋白质分子的高级改造（结构域的拼接） ;三、全新蛋白质的设计与构建 ;蛋白质工程自问世以来，短短十几年的时间，已取得了引人瞩目的进展，在医学和工业用酶方面也获得了良好的应用前景。 ;一、?消除酶的被抑制特性 ;二、引入二硫键，改善蛋白质的热稳定性 ;在高温下Asn和Gln容易脱氨形成Asp和Glu，而导致蛋白质分子构象的改变，使蛋白质失去活性。 对酿酒酵母的磷酸丙糖异构酶进行诱变改造。这种酶有两个相同的亚基，每个亚基含有2个Asn，由于它们都位于亚基之间的界面上，可能对酶的热稳定性起决定性作用。 通过寡核苷酸介导的定向诱变技术，将第14位和第78位上的2个Asn分别转变成Thr(苏氨酸)和Ile(异亮氨酸)残基，大幅度提高突变酶的热???定性。 ;四、?改变酶的最适pH值条件 ;五、提高酶的催化活性 ;;六、修饰酶的催化特异性 利用定点突变技术葡萄糖淀粉酶的催化特性。如将活性中心的GLu、Asp被Gln、Asn取代时，突变体酶分解α-1，4糖苷键和α-1，4糖苷键的活性比例发生明显改变。;改变Nisin氨基酸的序列，可增强其稳定性、溶解度和扩大抑菌谱等，扩大Nisin的应用范围。 ;;药物设计的改造;; 作为改变糖尿病患者命运的重要发现,胰岛素是糖尿病治疗中不可或缺的药物。传统胰岛素基本上都有见效慢、药效过长等问题。也就是说,患者需要在就餐前提早较长的时间注射胰岛素;而当其血糖降低到适度情况下之后,胰岛素的降糖效果可能会持续作用,容易导致低血糖的出现。胰岛素类似物的研发,能更好地模拟正常人体生理降糖模式,使糖尿病患者最大程度获益。?　　胰岛素类似物是采用基因工程技术,经过修饰人胰岛素分子的氨基酸序列而成的。 ;一、速效胰岛素类似物:?　　临床上主要的速效胰岛素类似物产品有赖脯胰岛素、门冬胰岛素。赖脯胰岛素:是胰岛素β链第28位脯氨酸与29位的赖氨酸互换位置而得到的。门冬胰岛素:是将胰岛素β链上28位脯氨酸替换成门冬氨酸而成。速效胰岛素的特点是:打开了常规胰岛素的六聚体形式,而成为单体结构,注射后不需要再分离成单体的过程,吸收快,起效时间短,进餐时不需提前注射,作用时间为1～3小时,主要用于降低餐后血糖,因而用于餐时注射时低血糖反应少见,可适用于各种类型的糖尿病治疗。 ;;