多孔磷酸钙骨水泥及丹参磷酸钙骨水泥复合物的研究生物医学工程专业论文.docxVIP

西南交通大学硕士研究生学位论文 西南交通大学硕士研究生学位论文 第1页 摘要 由于自固化磷酸钙骨水泥具有良好的生物学特性，室温下固化塑型，固化时 不放热等优点，已经成功地被应用于临床硬组织修复和替代。但是，磷酸钙骨 水泥缺少尺寸在100--500 ll m的适合组织长入的大孔，磷酸钙骨水泥植入体内 后新生组织难以长入其中，生物降解较缓慢；同时临床上的骨科疾病也需要相 关药物和生长因子的治疗。因此，制各含有适当孔隙率和尺寸的多孔磷酸钙骨 水泥和含有药物或生长因子的磷酸钙骨水泥，已经成为当前骨水泥研究的两大 热点。本论文的目的之一是通过添加适当尺寸和量的成孔剂，制备适合在体内 形成大孔的磷酸钙骨水泥；目的之二是通过探索具有成骨活性的中药，制备载 中药磷酸钙骨水泥，并利用体外细胞培养的方法评价其生物学性能。 根据文献，在本实验选择BiocementD的配方，磷酸钙骨水泥粉末由Ⅱ一磷 酸三钙(a—TCE a--Ca3(P04)2)，二水磷酸氢钙(DCPD,CaHP04．2H20)，经 烧结的羟基磷灰石(H～Ca5(P04bOH)和碳酸钙(CaC03)按58：25：8．5： 8．5的质量比混合而成，以Na2HP04和NaH2P04溶液作为固化液，分别制备或 选择粒径分布100--500ttm的聚乳酸微球、明胶微球、氯化钠、葡萄糖、甘露 醇作为成孔剂，制备含不同成孔剂的磷酸钙骨水泥，并用模拟体液浸泡模拟体 内成孔过程，从而制得多孔骨水泥。结果表明：通过聚乳酸微球降解可以制得 多孔骨水泥，但一般只能加入10wt％的聚乳酸的微球，超过此比例将导致磷酸 钙骨水泥不能凝固，聚乳酸微球降解速度有待通过分子量等优化；明胶微球具 有溶胀性能，使骨水泥无法固化；通过控制氯化钠、葡萄糖、甘露醇成孔剂的 量可以制各不同孔隙率的磷酸钙骨水泥，尤其氯化钠更有利于骨水泥固化，孔 隙率最高可达67％左右同时，孔隙的尺寸可以通过成孔剂颗粒的尺寸控制。 本实验在探索具有成骨活性药物过程中，首先选择了传统中药丹参，通过 70％乙醇回流提取其总成分，然后选择通过系统溶剂法萃取分离出石油醚提取 物、乙酸乙酯提取物、氯仿提取物、以及甲醇／水提取物：通过四甲基偶氮唑盐 西南交通大学硕士研究生学位论文 西南交通大学硕士研究生学位论文 第|I页 微量酶反应比色法(M11r法)检测各提取物对小鼠骨髓原代细胞增殖的作用， 确定出甲酵，水提取物为有效提取物；据文献报道甲醇，水提取物主要含丹参的水 溶性成分，并且丹酚酸B(salB)含量最大，原儿茶醛(P∞)含量次之，考虑 到脂溶性的丹参酮HA(Ts)也有用于骨科疾病治疗的报道，因此，我们购买了 丹酚酸B、原几茶醛和丹参酮HA的标准品；将不同浓度的标准品与小鼠骨髓 原代细胞进行体外培养，用alamar blue方法检测细胞增殖状况，通过测定碱性 磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALl)的含量检测细胞的分化程度，通过免疫荧 光和相差显微镜观察细胞形貌。结果显示：丹酚酸B为丹参中的有效成分，虽 然在浓度为160ug／ml具有细胞毒性，但在3～踟ug／ml浓度范围内具有显著的 成骨活性，并且随着浓度的降低其成骨活性越强；原儿茶醛在12．5～400 ug／ml 内具有细胞毒性，随着浓度降低其毒性越弱；丹参酮IIA在6～100 ug／ml内具 有细胞毒性，随着浓度降低其毒性越弱． 由于磷酸钙骨水泥属于植入体内的第三类医疗器械，本实验选择临床上已经 广泛使用的香丹注射液作为载药磷酸钙骨水泥的药物。根据前期结果，同样通 过体外细胞培养的各种检测方法检测香丹注射液对骨髓原代细胞的作用。结果 显示：当浓度范围为注射液原浓度的1／160和1／320倍时，促进细胞增殖；当为 注射液浓度的1／640和1／1280倍时，同时促进细胞的增殖和分化，并且随着浓 度的降低其成骨活性逐渐加强。以此研究为基础，我们制备了载香丹注射液的 磷酸钙骨水泥，当所得到的载药骨水泥中含有121．75ug／mi的丹酚酸B和195．35 ug／ml的原儿茶醛时，它可以显著促进小鼠骨髓原代细胞向成骨细胞分化同时不 影响细胞的增殖，降低载药量将可能提升载药骨水泥的成骨活性。 关键词：磷酸钙骨水泥；成孔剂；大孔；载药；丹参；丹酚酸B：香丹注射液 西南交通大学硕士研究生学位论文 西南交通大学硕士研究生学位论文 第1II页 Abst ract The calcium phosphate self-setting cements(cPO have many advantages，such as，the excellent biocompatibility,帆uing under ambient conditions，and almost without heat releas