蛋白质与其他物质的相互作用及其分析应用的研究分析化学专业论文.docxVIP

山东大学博士学位论文摘要 山东大学博士学位论文 摘要 蛋白质(protein)是生物体的基本组成成分之一，也是含量最丰富的高分子物 质，分布广泛，几乎所有的器官组织都含有蛋白质。生物体结构越复杂其蛋白质种 类和功能也越繁多。在物质代谢、机体防御、血液凝固、肌肉收缩、细胞信息传 递、个{本生长发育、组织修复等方面，蛋白质发挥着不可替代的重要作用。可见， 蛋白质是生命活动的物质基础，没有蛋白质就没有生命。因此，深入研究小分子物 质与蛋白质的作用机理，以及蛋白质与核酸之间的相互作用，特别是建立蛋白质以 及核酸快速、简便的分析方法，对分子水平上阐明生命的奥秘等方面具有重要的意 义，是当前生物分析化学研究的前沿和热点。 本论文以分析化学，生物化学与生物物理学为研究背景，利用荧光技术、光散 射技术、吸收光谱技术、圆二色谱技术、核磁共振技术、电视显微电泳技术和透射 电子显微技术等手段研究了小分子与蛋白质的作用机理，以及蛋白质与核酸之间的 反应，并将纳米技术引入生物分析领域，建立了蛋白质以及核酸快速、准确、简 便、灵敏而选择性的分析方法。 本文的绪论部分评述了蛋白质发光探针的基本原理、研究进展和发展趋势，以 及蛋白质与表面活性荆相互作用研究手段等，共引用文献212篇。此部分成果发表 在Journal of Chromatography B。 在本论文的第二部分中，深入研究了含芳香环的表面活性剂，阴离子的十二烷 基苯磺酸钠(SDBS)和阳离子的溴化十六烷基吡啶(CPB)分别与牛血清白蛋白 (BSA)之削的反应，全面考察了不同浓度表面活性剂对结合模式的影响，以及对 BSA分子构象的影响。发现了SDBS与BSA分子结合的单一性，和CPB与BSA 分子结合的多样性。研究表明，通过静电作用，SDBS与BSA的结合为“项链”模 式，即SDBS分子结合到BSA分子上，最终在其表面形成胶柬，此时SDBS的芳 环极性头基直接与BSA分子表面接触，与色氨酸残基发生芳环堆积效应，促进了 BSA的能量向SDBS上转移，并且这种转移以SDBS的单体为主；CPB在较低浓 度时也是遵循“项链”模式，与BSA分子结合，芳环头基固定在其表面，形成芳 坏堆积，促进两者之划的能量传递，但是此时传递的方向是由CPB到BSA。随着 CPB的浓度增加到第二临界胶束时，CPB形成了大的内腔疏水的棒状胶束，将 BSA分子装入其中，限制了BSA构象的伸展，诱导其发生再折叠，同时CPB的头 山东大学博士学位论文 山东大学博士学位论文 基从BSA表面脱离，芳环堆积效应消失，能量传递过程随之停止。本研究的主要 特点就是全面研究了不同浓度下的表面活性刘与BSA之州的作用，提出了毅的结 合模式，并且探讨了荧光共振能量传递与芳环堆积之恻的关系。本部分成果已经发 表在Biophysical Journal上。 在论文第三部分，我们研究了蛋白质存在下的两种共发光效应体系(Tb—Gd． SDBS．protein和Tb．Gd．protein．CPB)，建立了灵敏检测蛋白质的新方法，检出限 都达到了纳克级。并且详细研究了两个共发光体系的发光机理和能量传递过程，发 现SDBS和CPB在能量传递中的不同作用：SDBS不仅能将本身吸收的能量传递给 Tbp，而且作为能量传递的中介将BSA吸收的能量传递给Tb3+：而CPB除了将本 身的能量通过BSA传递给Tb3十外，还促进了BSA与Tb3+之间的能量传递。除此之 外，我们通过测定体系的荧光寿命，对体系荧光增强因子进行了量化的评估，以便 更深入地理解稀土共发光效应。本部分研究已发表在Biochimie和Chemcial Physical Letters上。 论文第四部分在已研究的稀土共发光体系Tb．Gd．SDBS一蛋白质的基础上，将新 近发现的余属纳米粒子表面增强效应引入其中，得到了更为灵敏的蛋白质测定方 法。首先考察了不同形态银纳米粒子对荧光体荧光的增敏效果，包括银岛膜、银胶 和毛面银电极，最终选择了增敏效果最好的银岛膜进行研究。另外，与一般选择 BSA或HSA作为隔离层的方法不同，我们选择无荧光性的胶原蛋白作为隔离介 质，实现了对BSA的准确定量，同时也提高了吸附能力。研究表明，与一般的水 溶液相比，银岛膜能增强Tb．Gd．SDBS．BSA共发光体系的荧光lO倍以上。研究表 明该基发光体系中能量传递的过程并没有改变，SDBS依然主要充当能量传递中介 的角色。但是这个角色主要是由SDBS的激发态二聚体来扮演的，这种变化可能是 银岛膜在该能量传递过程中的作用所致。我们认为．银岛膜增强了入射光的能量， 增强了入射局域场。使得附近的荧光体分子的荧光强度得到增强。另一方面银岛膜 纳米粒子的等离体共振也促进了共振能量传递过程。因而．与溶液中的稀±共发光 体系相比，在银岛膜诱导下，