肝细胞移植对裸鼠肝铜代谢的影响外科学专业论文.docxVIP

目 目 录 1 肝细胞移植对裸鼠肝铜代谢异常的影响 l 1．1 中文摘要 1 1．2 英文摘要 5 1．4材料与方法 9 1．5 结果 20 1．6 讨{仑 ·· ·· ．．3l 1．7 结论 36 1．8 参考文献 37 1．9英汉缩略词对照表 40 2 致谢 4 l 3 肝豆状核变性疾病与肝细胞移植治疗(综述) ．． ． 42 万方数据 四川医科大学硕士学位论文肝细胞移植对裸鼠肝铜代谢的影响 四川医科大学硕士学位论文 肝细胞移植对裸鼠肝铜代谢的影响 摘要 目的：1．通过铜负荷饮食法建立裸鼠的肝脏铜代谢异常疾病模型， 分离同种裸鼠肝细胞悬液，予以腹腔内移植，研究肝细胞移植对裸 鼠铜代谢的影响；2．通过检测脂质过氧化物质细胞色素P450 (cytochrome protein P450，CYP450)、肝丙二醛(MDA)、裸鼠肝组织 氧活性簇(ROS)及超氧化物歧化酶(SOD)的变化，探讨移植肝细胞 影响裸鼠肝铜代谢的可能机制。方法：1．裸鼠肝脏铜代谢异常疾病 模型的建立：裸鼠(4周龄，体重23±2．39)，于SPF级无菌动物饲 养房正常饲养l 0天适应环境后，采用铜饮食负荷法造模，喂饲混有 硫酸铜1．Og／kg的饲料和0．1 85％f均硫酸铜水4周。通过代谢笼收集 裸鼠24小时尿液测定尿铜值，抽血做肝功能检测来评价模型的建 立。2．实验分组：将40只裸鼠肝铜代谢异常模型随机分为2组， 肝细胞移植组(组1)及腹腔肝细胞培养液注射组(组2)，每组各 20只。取20只未造模裸鼠(同龄正常饮食饮水裸鼠)行肝细胞移 植做正常代谢对照组(组3)。另取40只同龄裸鼠作1对1肝细胞 移植的供体。3．裸鼠移植肝细胞悬液制备及实验干预。4．实验检 测：分别在细胞移植前1h，移植后3 d，7 d，1 4d，28 d对三组裸鼠 心脏穿刺抽血0．i ml行肝功(ALT、ALB、AST)检测、血清铜(s erum copper)含量测定、血清铜蓝蛋白(ceruloplasmin，CP)测定。在术 后7天、28天分别对3组裸鼠行活检取部分肝组织，所取肝组织 制成细胞匀浆检测肝脏铜含量，ELI SA测细胞色素P450 2E l蛋白 万方数据 四川医科大学硕士学位论文表达变化，肝组织匀浆的SOD活性，肝组织MDA含量，肝组织活性 四川医科大学硕士学位论文 表达变化，肝组织匀浆的SOD活性，肝组织MDA含量，肝组织活性 氧簇(ROS)浓度变化。移植后28天时行肝组织和移植细胞活检， 肝组织以1 0％的福尔马林溶液固定，石蜡包埋切片，采用HE染色 后，于光学显微镜下行病理学检测及肝铜染色。 5．统计学分析 计量资料使用均数±标准差描述，计数资料采用率和构成比描述； 两组间的比较采用t分析；检验水准(a)设定为0．05，尸0．0 5 为差异具有统计学意义。三组间比较采用方差设计，检验水准(a) 设定为0．05，K 0．05，上述统计分析均由SPSS 1 9．0统计软件进 行。 结果：1．通过铜负荷饮食后，建模组血清铜(4．38+0．17¨g／m1)明 显高于正常喂养组(1．05士O．05“g／m1)(P0．05)，建模组尿铜数值 (1 3 7．6±1 3．4卜tg／24h)明显高于正常喂养组尿铜值(2 5．5±6．1 gg／24 h)(P0．05)。铜过量负荷后，建模组肝功检测ALT、AST数值明 显高于正常喂养组(P0．05)，建模组蛋白合成水平ALB低于较正 常喂养组(P0．05)。 2．裸鼠移植肝细胞悬液制备良好，光镜下见典型肝细胞特征，台盼蓝染 色细胞活性大于90％。术后三组裸鼠于28d活检时均无死亡。28天活检 时候可见组1、组3裸鼠腹腔内生长的肝细胞团块，细胞团块活检HE染 色于光镜下可见肝细胞生长良好。 3．术前、术后组1、组2各时间点AST、ALT、血清铜均明显高于 组3，蛋白合成水平及血清铜蓝蛋白含量均低于组3，有显著差异 万方数据 四川医科大学硕士学位论文性(P0．05)。移植术前1h组1裸鼠AST、ALT、ALB、血清铜、血 四川医科大学硕士学位论文 性(P0．05)。移植术前1h组1裸鼠AST、ALT、ALB、血清铜、血 清铜蓝蛋白检测结果与组2比较无明显差异性(尸0．05)，组1术 后3 d，7 d、1 4d、28d时AST、ALT、ALB、血清铜、肝铜蓝蛋白检 测结果与组2比较有显著差异性(尸0．05)。术后28d所测组1肝铜 含量(35．97士1．45I，tg／g)明显低于组2肝铜水平(53．30±3．17卜tg／g)(尸 O．05)。 4．裸鼠肝组织病理学检测：干预后28d，组1肝组织肝细胞结构略显混 乱，轻微水肿，肝细胞呈条索状排列，可见少量点状坏死肝细胞，少量 肝细胞核浓缩深染，有的细胞核溶解消失。组2可见自身肝脏肝细胞