硼替佐米调控泛素连接酶e3家族成员表达水平对前列腺癌抑制作用的分析肿留学专业论文.docxVIP

河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 啾戳强_磋和≯嚣‰日 ；可北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究生签名： 碍 导师签章： 沁ls 日 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 4 英文缩写 8 研究论文硼替佐米调控泛素连接酶E3家族成员表达水平对前列腺癌抑 制作用的分析 前言月U舌 “99“ 材料与方法 一： 10 结果 16 附图 ··18 附表 一22 讨论 ·24 结论 ·28 参考文献 ··28 综述泛素连接酶E3 Nedd4．1ike家族与癌症关系的研究进展 ： ··3 1 致谢 ”42 个人简历 _ ．．． 43 万方数据 中文摘要硼替佐米调控泛素连接酶E3家族成员表达水平对前列腺癌抑制 中文摘要 硼替佐米调控泛素连接酶E3家族成员表达水平对前列腺癌抑制 作用的分析 摘 要 目的：前列腺癌是危害全世界男性健康的首要恶性肿瘤之一，在欧美 等西方国家前列腺癌的年发病率居男性肿瘤的第1位，死亡率居第2位， 在我国，前列腺癌发病率已跃居为男性恶性肿瘤的第3位。前列腺癌常为 隐匿发病，确诊时多已经发生浸润或转移，其高死亡率及高术后复发率主 要与其易转移有关，死于前列腺癌的患者中85％～100％合并远处转移。 前列腺癌细胞最远转移部位是骨，晚期前列腺癌骨转移十分常见。大多数 发生远处转移的前列腺癌会发展为雄激素非依赖性前列腺癌，因此常规的 内分泌治疗效果不理想。目前针对发生远处转移的前列腺癌尚无有效的治 疗方法，预后极差，生存期一般短于2年。因此，深入探讨前列腺癌发生 机制，找寻治疗前列腺癌关键靶点及切实有效的治疗药物迫在眉睫。泛素 连接酶E3具有调控基因转录、稳定质膜蛋白、降解错误蛋白与抑癌因子 等多种作用，参与恶性肿瘤发生发展过程。泛素连接酶E3 Smurfl、Smurf2 及WWPI均包括一个C2区域，2—4个WW区域和一个HECT区域，故 具有相似的功能与共同的特性。大量的研究指出泛素连接酶E3家族成员 与前列腺癌的发生、迁移、浸润和转移密切相关，如研究发现WWPl在 多种侵袭性前列腺癌细胞株中高表达，而且下调WWPl表达水平可导致 癌细胞生长抑制。硼替佐米是一种新型泛素一蛋白酶体通路抑制剂，目前 主要作为抗多发性骨髓瘤药物应用于临床，虽有研究发现硼替佐米可抑制 前列腺癌发生及浸润，且可抑制肿瘤远处转移，但具体量。效关系、时间． 效果关系及其作用机制尚不明确，已有资料提示硼替佐米对泛素连接酶 E3 Smurfl、Smurf2及WWPl表达水平亦有调节作用。本研究旨在分析探 讨硼替佐米通过调控泛素连接酶E3 Smurfl、Smurf2及WWPl的表达水 平，从而对前列腺癌细胞增殖发挥抑制作用，为Smurfl、Smurf2及聊1 作为前列腺癌治疗新靶点及硼替佐米应用于前列腺癌治疗提供依据。 本研究应用一系列实验方法，通过检测药物处理对雄激素非依赖性人 前列腺癌PC3细胞株的细胞增殖率、Smurfl、Smutf2及WWPl mRNA及 万方数据 中文摘要蛋自表达水平的影响，进而探索硼替佐米对前列腺癌细胞增殖的作用模式 中文摘要 蛋自表达水平的影响，进而探索硼替佐米对前列腺癌细胞增殖的作用模式 及机制。 方法： 1细胞培养在严格无菌的环境下，将人前列腺癌PC3细胞接种于含 DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)培养基的细胞培养瓶中培养， 隔日换液，待细胞汇合度达90一-95％时，以胰蛋白酶进行消化，并进行传 代培养，待传至3—5代后取细胞进行实验。 2分组 2．1空白对照组(不进行任何药物处理)； 2．2硼替佐米处理组(硼替佐米浓度梯度设置为：0．5、5、15、25Ⅲzol／L， 作用时间：24 h、48 h，72 h) 3细胞增殖率测定采用Brdu ELISA法测定各组细胞增殖情况及其活性 变化。 4细胞泛素连接酶Smurfl、Smurf2及WWPl mRNA水平测定硼替佐米 处理PC3细胞72小时后，提取细胞内RNA。应用实时定量聚合酶链式反 应(Real time—PCR，Real Time—Polymerase Chain Reaction)对各组细胞泛 素连接酶WWPl、Smurfl及Smurf2 mR_NA水平进行检测。 5细胞泛素连接酶Smurfl、Smurf2及WWPl蛋白表达水平测定硼替佐米 处理PC3细胞72d时后，提取蛋白并采用BCA法测定蛋白浓度。应用 Western blotting方法对各组细胞泛素连接酶S