基于斑马鱼睡眠行为探讨中药复方及表面活性剂对生物的影响及其作用机制-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包 含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所 涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 王亚楠 2015 年 5 月 25 日 非公开学位论文标注说明 （本页表中填写内容须打印） 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申 请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本 说明为空白。 论文题目 申请密级 □限制（≤2 年） □秘密（≤10 年） □机密（≤20 年） 保密期限 20 年 月 日至 20 年 月 日 审批表编号 批准日期 20 年 月 日 南开大学学位评定委员会办公室盖章（有效） 注：限制★2 年（可少于 2 年）；秘密★10 年（可少于 10 年）；机密★20 年（可少于 20 年） 摘要 摘要 摘要 抑郁是一种具有严重危害性的神经系统疾病，抗抑郁中药复方对于抑郁症 的治疗具有多重优势，但是其作用机制仍不清楚。本论文中，选择了七个经典 的抗抑郁中药复方（TCM），利用自动的视频追踪系统对受精后 4 天（dpf）的 斑马鱼幼鱼睡眠/觉醒行为连续进行 48 h 的观察，基于 5 个行为学参数，通过中 药与西药的相关性分析，研究预测归脾汤作用靶点可能为伽马氨基丁酸（GABA） 和谷氨酸，桃红四物汤、杞菊地黄丸及六君子汤可能作用于肾上腺素、五羟色 胺（5-HT）及多巴胺（DA）信号通路，甘麦大枣汤和温胆汤与经典的抗抑郁药 马普替林、阿米替林可能具有相同的作用机制，这些结果还需进一步的体外及 体内实验验证。本论文基于斑马鱼行为学评价平台，能实现自动的、高通量的、 快速的药物及小分子化合物筛选。这个研究是首次在体内结合中药研究和斑马 鱼睡眠/觉醒行为，为探究传统中药复方的生物靶点提供了一个新的思路。 表面活性剂由于其良好的物理化学性质广泛应用于工业、农业及日常生活 中，作为一种有机污染物，表面活性剂对水生生物的毒性也受到广泛的关注。 本文中探究了三种不同电荷的表面活性剂对斑马鱼幼鱼睡眠行为及早期发育的 影响，分别是十二烷基硫酸钠（SDS）、十二烷基二甲基苄基氯化铵（1227）及 脂肪醇聚氧乙烯醚（AEO-7）。首先，通过自动的视频追踪系统对 4 dpf 的斑马鱼 幼鱼睡眠/觉醒行为进行 48 h 的观察，基于 5 个行为学参数，结果表明：1227 增 加了幼鱼的自发活动量，而 AEO-7 降低了其活跃程度。进一步，对斑马鱼胚胎 进行表面活性剂处理后，SDS、1227、AEO-7 均导致了幼鱼发育延迟，并且造成 了头面积、眼面积及体长缩小，AEO-7 处理组变化最显著。为了探究其机制， 我们检测了胚胎外包标记 ntl 与斑马鱼脑部发育相关基因 krox20 的表达水平，原 位杂交结果表明这两个基因的表达模式均发生了改变，定量实时聚合酶连锁反 应（qRT-PCR）结果显示表面活性剂处理组 ntl 的表达量增加，而 krox20 的表达 量降低。这些数据进一步完善了不同类型表面活性剂的生态毒性评估，为表面 活性剂的安全使用提供了依据，对表面活性剂污水的排放起到了警示作用。 关键词：斑马鱼；抗抑郁中药复方；表面活性剂；睡眠/觉醒行为；基因表达 I Ab Abstract Abstract Depression is a type of nervous system disease, and the traditional Chinese medicines (TCM) possess great advantages over the treatment of depression. However, the mechanism of therapeutic action remains uncertain. Here, we selected seven classical TCM prescriptions and utilized an automatic video-tracking system to monitor the rest/wake behavior of larval zebrafish at 4 days post-fertilization (dpf) for 48 hours. Based on five behavioural parameters and the correlation analyses between TCM prescriptions