基于功能核酸组装结构的腺苷和汞离子传感器研究-分析化学专业论文.docx

摘要 摘要 摘要 本论文主要开展了以功能DNA为基础的新型传感器的研究。在合理设计 DNA组装结构的基础上，将DNA适配体和G．四螺旋DNA酶的裂分体的序 列相融合，结合对DNA分子的构象和力学性质的控制，以适配体和DNA酶 分别作为目标识别和信号转导元件，分别组装构造了腺苷和汞离子的比色型均 相光学传感器。另外，还对电活性分子标志物二茂铁与多种含氨基小分子化合 物之间的偶联反应进行了研究，对基于DNA适配体的信号增强型腺苷电化学 传感器进行了初步的探索。具体内容如下： 提出了对可结合氯高铁血红素(heroin)的G．四螺旋脱氧核酶进行分子内 对称裂分的思路，通过这种裂分型的DNA酶与腺苷的DNA适配体之间合理 组装，构建出腺苷的高选择性光学比色传感器。在钾离子的帮助下，裂分的DNA 酶的两半将重新结合形成完整的G．四螺旋结构，并在进一步结合氯高铁血红素 分子后形成具有过氧化酶活性的DNA酶。该DNA酶在H202存在下，能够 催化氧化ABTS(2，2-azino．bis(3．ethylbcnzothiazoline)．6．sulfonic acid)生成蓝 绿色的自由基阳离子产物ABTS”。目标物腺苷存在时，与传感器DNA的适 配体区域结合，引起传感器组装体的构象变化，导致G．四螺旋结构与氯高铁血 红素之间不能有效复合，抑制了其对ABTS的催化能力，体系光学吸收信号减 弱。由于腺苷与适配体之间具有高度特异性亲和作用，该传感器能够达到较高 的灵敏度和优异的选择性，在目前条件下所达到的最低检测限为6 I．tM，而且 完全不受其它三种核苷类似物的干扰。本传感器具有简单、易构造、均相、廉 价等优点。 基于Hg(II)对特定DNA碱基序列的识别作用和DNA酶的催化作用， 以及我们提出的分子内裂分型DNA酶的概念，进一步对以上腺苷传感器的原 理进行拓展，构造了纯粹由DNA组装而成的、无需化学标记的Hg(II)比色 传感器。以T．T碱基错配为基础，使用对Hg(II)有特异结合能力的一种发夹 结构序列替代腺苷传感器中的适配体，以分子内G．四螺旋结构裂分的两个片段 之间的分离与结合作用实现传感器的信号转导，构造了对H92+有灵敏响应的 均相光学吸收型传感器。当溶液中有Hg(II)存在时，其与发夹识别序列的特异 相互作用导致传感器的构象发生变化，抑制了G．四螺旋结构的两个裂分体与氯 高铁血红素之间的结合作用，导致传感器的光学输出信号减小。该传感器具有 很高的灵敏度，最低检出限为4．5 nM(0．9 ppb)，高于或相当于文献报道的同 类传感器，低于美国环境保护署(EPA)规定的饮用水中的H92+中毒水平(10 nM)。这种新的汞离子检测方法也有着良好的选择性，即使在高浓度的其它金 摘要属离子存在时，也不会产生干扰。本传感器具有简单、模块化、易构造的特点， 摘要 属离子存在时，也不会产生干扰。本传感器具有简单、模块化、易构造的特点， 更重要的是，这种传感器避免了其它方法所涉及的化学标记反应或纳米粒子的 合成及修饰，降低了检测的成本，提高了实验的稳定性。 对二茂铁单甲酸与多种氨基小分子化合物之间的偶联反应进行了研究，对 部分合成产物进行了分离和表征。得到了二茂铁．胱胺的偶联产物，并对该产物 在金电极表面的电化学稳定性和电子转移特性进行了表征，对基于DNA的信 号增强型腺苷电化学传感器进行了初步探索。 关键词：适配体DNA酶裂分式铲四螺旋结构腺苷汞离子比色法传 感器二茂铁 n AbstractABSTRACT Abstract ABSTRACT Two novel structured sensor assemblies for adenosine and Hg(II)were successfully built based on functional DNA molecules and were well characterized． These new sensors all exhibited satisfying sensitivities and excellent specificities against various analogous species．In addition，ferrocenecarboxylic acid derivated functional small molecule compounds were synthesized through N-hydroxysuccinimide ester activated amidation reactions．A DNA-based signal-on type adenosine electrochemical sensor was also designed