碱性成纤维细胞生长因子促进人血管内皮细胞增生的研究-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

470组。48小时后进行各项检测。采用MTT试剂(3一(4，5一二 470组。48小时后进行各项检测。采用MTT试剂(3一(4，5一二 甲基噻唑一2)2，5一二甲基四氮唑溴盐)比色分析法测定EC生长 活性；采用流式细胞计数仪检测Ec周期各时相相对细胞数；采用 免疫组化方法检测EC中NF—KB和ki一67的表达；实验结果采 用SPSS软件包进行数据统计分析和处理。 结 果 MTr检测结果，与对照组相比，bFGF显著刺激EC增生，使细 胞数增加(P0．05)；bFGF可减轻Dex和TNP一470对EC增生的 抑制作用(Po．05)。流式细胞仪分析结果，bFGF使Go／G，期Ec 比例减少，S期和GJM期比例增加，PI值增大(P0．05)；TNP一 470使G。／G，期Ec比例上升，S期和G：／M期比例下降，PI值降低 (P0．05)；且bFGF可阻断TNP一470对Ec增生的抑制，使PI 值接近正常(P0．05)。免疫组化结果显示，正常对照组，ki一67 在核内极少表达，NF—KBp65蛋白棕褐色染色多位于胞浆；bFGF 组，胞核内ki一67和NF—KBp65蛋白表达均增加，可见棕褐色点 状分布的颗粒，与对照组相比，差异显著(P0．01)；Dex和TNP一 470使胞核染色明显变浅，阳性细胞数目显著减少，阳性率降低 (TNP～470组，P0．05)；bFGF可逆转此抑制效应。 讨 论 外用FGF促进创面愈合已被许多实验所证实，但尚不清楚其 作用的相关机制。本实验验证了bFGF对培养的HUVEC增生的 调控作用。MTr分析结果可见，bFGF刺激Ec增生，使细胞数增 加。ki一67是一种细胞增殖核抗原，除Go期外，细胞周期所有活 性阶段均有表达。本实验应用鼠抗人ki一67单克隆抗体检测bF- ·2· GF对细胞周期的影响，结果显示，bFGF可促进EC核内ki一67的 GF对细胞周期的影响，结果显示，bFGF可促进EC核内ki一67的 表达，刺激Ec由静止期进入增殖期，加速细胞周期进程。流式细 胞仪检测结果显示，bFGF使G。／G：期EC比例减少，S期+G：／M 期比例增加。以上均表明bFGF有显著促进Ec增生的作用，是 EC增生的有力刺激剂。 本研究进一步探讨bFGF促EC分裂作用的机制。细胞外的 bFGF与其细胞膜上两种相关受体(HSPG和bFGFR)形成复合物， 通过一系列信号级联传导途径将信号传至细胞核。核转录因子 NF—KB为一重要的调节因子，静息状态下，与其抑制蛋白IK—B 偶联，以无活性形式驻留在胞质内。受刺激活化后，IK—B被降 解，NF—KB则从胞浆移位入胞核发挥其调控功能。本实验应用 兔抗人NF—KBp65多克隆抗体检测Ec内NF—KB的活化，结果 表明，bFGF可活化NF—KB，使其在核内表达增加。由此推测，bF． GF显著促进EC增生的可能机制是通过NF—KB活化，从而促进 DNA合成、细胞分裂增生。 TNP一470可抑制EC生长和迁移，为特异性血管生成抑制 剂。本实验表明，TNP一470单独作用使细胞数减少，核内ki一67 表达减少，NF—KB表达明显降低，PI值下降；而bFGF可减轻此 抑制作用。 Dex是一种非特异性NF—KB阻断剂，可诱导IK—B的合成， 阻止NF—KB释放，从而抑制依赖NF—KB的转录。本实验显示， Dex对未受刺激的EC增生无显著影响，可使核内l【i一67表达减 少，NF—KB表达明显降低；加入bFGF使其抑制增生作用逆转。 结 论 1．bFGF使体外培养的Ec数目增加，ki一67表达增强，PI值 增大，显著促进EC增生。 -3· 2．bFGF促Ec增生的可能机制是通过活化NF—KB，使细胞由静止期进入增殖期，促进DNA合成、细胞分裂增殖。 2．bFGF促Ec增生的可能机制是通过活化NF—KB，使细胞 由静止期进入增殖期，促进DNA合成、细胞分裂增殖。 3．，INP一470使细胞数减少，ki一67与NF—KB表达降低，PI 值下降，抑制Ec分裂与增殖；bFGF可逆转其抑制效应。 5．Dex对未受刺激的EC增生元显著影响，可抑制ki一67与 NF—KB表达；bFGF使其作用逆转。／ 关键词：碱性成纤维细胞生长因子；内皮细胞；核因子一KB；l【i 一67；创伤修复 ·4· study study on human endotheHa cell proliferation stimulated by basic fibroblast growth factor objective Trauma is one of the dangerous diseases occurs widely in ad- vanced society．So the problem of the wound