碱性成纤维细胞生长因子对缺血脑组织的保护机制及其安全性-病理学专业论文.docxVIP

碱性成纤维细胞生长因子对缺血脑组织 碱性成纤维细胞生长因子对缺血脑组织 的保护机制及其安全性 摘要 目的： 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种重要的神经营养因子，应用外源 性bFGF治疗缺血性脑中风已经成为研究的热点。当前的研究主要集中于应用外 源性bFGF缩小梗死灶面积，并探讨给药途径，然而对其保护机制及使用安全性 少有研究。本实验旨在： 1．观察外源性bFGF对大鼠持续性大脑中动脉栓塞后脑梗死灶的影响。 2．观察应用bFGF后梗死灶周边区表达早期生长反应蛋白一1(Egr—1)、 bFGF、碱性成纤维细胞生长因子受体(bFGFR)的细胞种类、表达时相以及不 同种类细胞之间的相互影响。 3．观察长期应用bFGF后有无中枢神经系统肿瘤的形成。 ／材料与方法： ＼第一部分取Wistar雄性大鼠56只，制备持续性右侧大脑中动脉线栓模型 后分成7个大组，每大组8只，其中3只为对照组，5只为给药组，栓塞后2小 时一次尾静脉给予生理盐水或bFGF，观察时程为给生理盐水或bFGF后3，6， 12h，l，3，7，14d。另6只大鼠为正常组与假手术组。视交叉处取材，石蜡切 片(41Jm)H．E．染色，Scion图象软件计算脑片梗死灶占右侧大脑半球的面积比， 冰冻切片(5pro)免疫组化染色ABC法观测Egr一1、bFGF、bFGFR，原位杂交 染色(地高辛标记寡核苷酸探针)观测bFGF mRNA的表达。 箍三部佥取Wistar雄性大鼠lo只，制备持续性右侧大脑中动脉线栓模型， 栓塞后2小时起腹腔给药(bFGF)，以后第一个月4次(每周一次)，第二个月2 次(每两周一次)，第三个月1次(月初一次)，共8次，第三个月末处死动物。 大体观察，鼠脑冠状切面每隔4mm取材，制作石蜡切片(41Jm)，H．E．染色观 察。 结果： !：鲢：曼：裟鱼：与对照组相比，给药组在各时间段梗死灶面积均有不同程度 的缩小，其面积比缩小分别为3h，19．35％、6h，19．31％、12h，18．76％、1d，23．53％、 3d，16．71％，P值均小于0．05。 2：基墼：i鎏色：对照组在3h可见神经元和星形胶质细胞的阳性染色明显增 强，6h起表达开始下降，12h已恢复至正常水平，给药组的表达时相类似于对照 强，6h起表达开始下降，12h已恢复至正常水平，给药组的表达时相类似于对照 组，但其6h时的表达强度高于3h，且上述两时问段的表达强度均高于对照组， 表明外源性bFGF能通过即早反应基因Egr-1的表达增强及时相变化来影响晚期 反应基因bFGF的表达。 3．bFGF染色：对照组6h其bFGF的表达增强与正常组相比无显著差异， 12h其bFGF的表达明显增强，而给药组6h已有bFGF的表达增强的第一峰出现， 主要见于星形胶质细胞，神经元表达较星形胶质细胞弱，提示外源性bFGF能诱 导内源性bFGF的提前表达。无论给药组还是对照组12h起的bFGF表达均维持 于显著增强状态，7d达高峰后下降，这可能与反应性胶质化有关：在神经元和 星形胶质细胞中均见有bFGFmRNA的表达。 4： 避基鎏鱼：bFGFR呈现早期，一过性表达，3h即达高峰，6小时起 下降，12h后快速减弱至正常水平，在对照组其表达高峰早于内源性bFGF表达 高峰。给药组与对照组未发现有表达时相和强度的差异，提示外源性bFGF并不 通过改变bFGFR的表达发挥作用，而是由于外源性bFGF使内源性bFGF表达 峰值前移至6小时，使之与bFGFR表达增强过程有较长时间的重叠丽发挥作用， 这可能是外源性bFGF发挥神经保护作用的主要机制。 5：塑疸丝：蝴外源性bFGF3个月(相当于人类使用5年)，各例均未发现 有肿瘤形成。y 结论： 1．外源性bFGF能缩小梗死灶，栓塞后2小时一次静脉注射bFGF其面积 比缩小17％一24％(pO．05)。 2．外源性bFGF通过Egr-1蛋白高表达使内源性bFGF的表达增高且提前， 从而与bFGFR的表达增强过程重叠而发挥保护作用。 3．长期使用外源性bFGF未发现对中枢神经系统的致瘤作用。 √、，／。 、 关键词 大鼠 局灶性脑缺血 碱性成纤维细胞生长因子碱性成纤维细胞 生长因子受体致瘤性 L． 。 2 The The protection mechanism and safety of basic fibroblast growth factor in brain ischemia Abstract PURPUSE： Basic fibroblast growth factor(bFGF)is an important neurotrophic factor．The exogenous administration of bFGF has been greatl