碱性体系下高稳纤维素酶的构建-化学工程与技术专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 万方数据 万方数据 青岛科技大学研究生学位论文 碱性体系下高稳纤维素酶的构建 摘 要 纤维素是储量最多的可再生资源，充分地利用纤维素资源得到了普遍的关 注。由于纤维素的自身高度结晶结构严重阻碍了纤维素的利用，因此寻找有效溶 解纤维素的绿色溶剂成为了关键。氢氧化钠/尿素水溶液是目前公认的有效溶解 纤维素的绿色溶剂。但是纤维素酶在碱性体系下，活性会降低，给降解纤维素带 来了许多困难。本课题采用大分子结合修饰的方法构建在碱性体系下具有高稳性 的纤维素酶并对其动力学进行了测定，为纤维素的综合利用提供了有利的参考。 本文主要采用分子量为 5000, 10000, 20000 单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺和 分子量为 5000 的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺对纤维素酶巯基和氨基进行化学 修饰，制得了四种修饰纤维素酶。测定了修饰纤维素酶的平均巯基修饰度和氨基 修饰度及在氢氧化钠/尿素体系中的动力学参数。利用红外光谱和原子力显微镜 对修饰纤维素酶和天然纤维素酶进行了表征。 利用修饰纤维素酶和天然纤维素酶在同种体系下进行降解羧甲基纤维素，测 定修饰纤维素酶活性。将修饰纤维素酶降解羧甲基纤维素的反应液分别放置在 0 ℃, -5 ℃, -10 ℃和-15 ℃进行纤维素酶的析出。并将析出的修饰纤维素酶通过两 种方法来测其酶活，一种是直接向反应液中加入羧甲基纤维素，另一种是将反应 液倒出在加入羧甲基纤维素。 根据纤维素酶由三种单酶组成，分别降解了不同的底物：外切葡聚糖酶降解 微晶纤维素、内切葡聚糖酶降解羧甲基纤维素和纤维二糖酶降解纤维素二糖，以 测其酶活，结果表明纤维二糖酶的活性为最高，纤维二糖酶对复合纤维素酶降解 纤维素的影响最大。向复合纤维素酶中加入不同量的纤维二糖酶，考察纤维二糖 酶的量对复合纤维素酶的影响，实验结果表明，随着纤维二糖酶含量的增加，对 降解纤维素的效率有一定的提升，但是纤维二糖酶过量，会抑制酶解的效果。 通过本研究制备出在氢氧化钠/尿素的强碱体系下高稳修饰纤维素酶，并测 定了相关的动力学参数，实现了酶的重复利用，扩展了纤维素酶的应用范围，为 纤维素的高值化利用提供了有效的参考依据。 关键词：化学修饰 纤维素酶 羧甲基纤维素 米氏常数 I 碱性体系下高稳纤维素酶的构建 II 青岛科技大学研究生学位论文 THE CONSTRUCTION OF HIGH STABILITY CELLULASE UNDER ALKALINE ABSTRACT Celllulose was the largest renewable resources and used cellulose resources had been attracted wildly attentions. Because highly crystalline structure of cellulose was a serious impediment to use cellulose, therefore, we found effective green solvents had become a keystep. NaOH / Urea was widely recognized as green solvents, and can effectively dissolve cellulose resources. However, cellulase would reduce the activity under alkaline system. In this article, new cellulose was constructed under alkaline system anddetermined its kinetics, which provided a favorable reference data for using cellulose. Cellulase was modified with MW of 5 K,10 K and 20 K monomerhoxyl-Polyethy -leneglycol maleimide(mPEG-MAL 5 K) and MW of 5 K monomethoxyl-polyethylene glycol succinimide (mPEG-SPA 5 K), then four kinds of modified cellulases were obtained. And we determined the average of thiol and amino of modified cellulases. The modified cellulases and native cellul