胶质瘤干细胞的体外磁性标记和MR示踪研究影像医学与核医学专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 4 中 英 文 缩 写 词 对 照 缩 写 英文全称 中文全称 GSCs glioma stem cells 胶质瘤干细胞 PBS phosphoric buffer solution 磷酸缓冲液 TA transfection agent 转染剂 PLL poly-L-lysine 多聚赖氨酸 USPIO ultrasmall superpararmagnetic iorn oxide  超小超顺磁性氧化铁 MRI magnetic resonance imaging 磁共振成像 T2 transverse relaxation time 横向弛豫时间 R2 relaxation rate 弛豫率 T2WI T2-weighted imaging T2 加权成像 TR repeat time 重复时间 TE echo time 回波时间 FOV field of view 视野 FA Flip angle 翻转角 MTT 3-(4,5)-dimethylthiazal-2yl)-2,5- diphenytetrazoliumromid 溴化 -3(4,5)- 二 甲 基 噻 唑 -2)-2,5-二苯基四氮唑 胶质瘤干细胞的体外磁性标记和 MR 示踪研究 摘 要 研究背景与目的：神经胶质细胞瘤是颅内最常见的实体肿瘤，占全部原发性脑肿 瘤的 60%以上，其中以Ⅳ级胶质瘤恶性程度最高，具有难治疗、易复发、死亡率 高等特点。虽然临床上采用外科手术、术后放疗、化疗等综合治疗，胶质瘤的预 后依然较差。随着 2002 年 Ignatova 等报到了皮层的胶质瘤存在神经干细胞样细胞， 胶质瘤干细胞（GSCs）引起了国内外专家的注意，胶质瘤干细胞也得到越来越多 的认同。胶质瘤干细胞具有自我更新、增殖和多向分化等干细胞特性，是胶质瘤 的起源细胞，也是术后复发的关键，它的发现为临床胶质瘤的治疗提供了新的策 略。 本实验研究采用无血清培养法从大鼠 C6 胶质瘤中提取、分离胶质瘤干细胞， 并对其进行鉴定；然后在体外以多聚赖氨酸（PLL）为转染剂、利用超小超顺磁性 氧化铁颗粒（USPIO）标记胶质瘤干细胞，观察、检测磁性标记对胶质瘤干细胞生 物学特性的影响；对磁性标记干细胞进行磁共振扫描，寻找体外成像磁性标记细 胞的最佳序列，为观察原位种植胶质瘤干细胞的迁移、分化等生物学特性研究提 供依据。 材料和方法：C6胶质瘤细胞原位种植于250-300g左右的SD雄性大鼠大脑半球内， 一定时间后（15天左右）取出肿瘤，消化、分离，用含生长因子的无血清培养液 重悬细胞，并连续传代。以PLL-USPIO为细胞内对比剂对GSCs进行磁性标记，计 算不同天数（1、3、5天）细胞标记阳性率、细胞活力；四氮噻唑蓝(MTT)比色试 验法评价磁性标记对GSCs增殖能力的影响；将胶质瘤干细胞重新原位种植于大鼠 脑组织中观察磁性标记对胶质瘤干细胞成瘤能力的影响；然后不同细胞浓度的悬 液进行MR T2map、T2*map序列扫描，计算弛豫时间及弛豫率，研究评价弛豫率 和细胞浓度之间的关系，并进行统计学相关分析。 结果：大鼠C6胶质瘤分离、消化后采用无血清培养液培养、传代可以得到胶质瘤 干细胞。利用PLL转染USPIO可以高效率标记胶质瘤干细胞，普鲁士蓝染色显示72 小时干细胞标记率达92％以上；台盼蓝染色、MTT比色法及原位成瘤实验结果显 示，磁性标记对胶质瘤干细胞生物学特性无明显影响。体外磁共振T2map及T2*map 序列扫描结果显示细胞弛豫率与细胞浓度呈线性正相关，R2*效应直线斜率约为R2 的2.40倍。 结论：大鼠C6胶质瘤中可以分离、培养得到胶质瘤干细胞。以PLL为转染剂，一 定浓度的USPIO能够在体外高效率标记GSCs而不影响干细胞的生物学特性。临床 应用型GE3.0 T 磁共振T2*map序列可以灵敏的检测PLL-USPIO标记的胶质瘤干细 胞的浓度变化。 关键词：胶质瘤干细胞 磁共振成像 超小超顺磁性氧化铁颗粒 Magneticlly labeling of rat glioma stem cells and MR tracking in vitro ABSTRACT Backgrounds and Purpose Neurogliocytoma is the most common type solid tumors in central nervous system in adult ,with the percentage of 60 in intracranial primarily tumor.Glioblastomas(WHO grade Ⅳ gliomas),have the fea