洁泽1号对阴道上皮细胞抗白色念珠菌天然免疫相关因子影响的实验分析-中西医结合;临床专业论文.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文名称 JZ NO.1 VK2 JieZe NO.1 VK2/E6E7 洁泽 1 号 永生化人阴道上皮细胞 C.albicans Candida albicans 白色念珠菌 VVC Vulvovaginal Candidiasis 外阴阴道假丝酵母菌病 RVVC Recurrent Vulvovaginal Candidiasis 复发性外阴阴道假丝酵母菌 病 TLRs PRRs Toll-like Receptors Pattern Recognition Receptors Toll 样受体 模式识别受体 PAMPs Pathogen-associated Molecular 病原相关分子模式 Patterns VEC Vaginal Epithelial Cells 阴道上皮细胞 PLM Phospholipomannan 磷脂酰甘露聚糖 LPS Lipopolysaccharide 脂多糖 MyD88 NF-κB HBD IL-8/CXCL8 IL-1β TGF-β TNF-α MCP-1 Ct Myeloid Differentiation factor 88 Nuclear factor-κB human β-defensin Interleukin-8 Interleukin-1 beta transforming growth factor-β Tumor necrosis factor-α Monocyte chemoattractant protein-1 Threshold cycle 髓化分样因子 88 核因子 κB 人类 β 防御素 白细胞介素 8 白细胞介素 1β 转化生长因子 β 肿瘤坏死因子 α 单核细胞趋化蛋白-1 临界循环数 洁泽 1 号对阴道上皮细胞抗白色念珠菌天然免疫 相关因子影响的实验研究 中文摘要 第一部分：洁泽 1 号对人阴道上皮细胞抗白色念珠菌 TLR2、 MyD88 mRNA 影响的实验研究 目的： 观察中药复方洁泽 1 号及其主药有效成分小檗碱对永生化人阴道上皮细胞 （VK2/E6E7）天然免疫因子 TLR2、MyD88 mRNA 的影响，探讨洁泽 1 号是否可 能通过 TLRs 信号途径在人阴道上皮细胞抗白色念珠菌天然免疫中发挥作用，为明 确洁泽 1 号预防和治疗外阴阴道假丝酵母菌病的机制提供进一步的实验依据。 方法： 设置空白对照组（单独培养的 VK2/E6E7 ）、白色念珠菌热灭活孢子与 VK2/E6E7 共培养（比例为 10:1）各时间段组（1h，3h，6h，12h，24h，48h）。提 取各组细胞总 RNA，实时荧光定量 PCR(real-time quantitative PCR)检测细胞 TLR2、 MyD88 mRNA 的表达。 药物预防实验：设置空白对照组，模型组（VK2/E6E7 与白色念珠菌共孵育）， 细胞+洁泽 1 号+白色念珠菌组、细胞+小檗碱+白色念珠菌组、细胞+甘露聚糖+白 色念珠菌组（药物与细胞共孵育后，再加入白色念珠菌共培养）。 药物治疗实验：设置空白对照组，模型组（白色念珠菌与 VK2/E6E7 共孵育）， 细胞+白色念珠菌+洁泽 1 号组、 细胞+白色念珠菌+小檗碱组、细胞+白色念珠菌+ 甘露聚糖组（白色念珠菌与细胞共孵育后，再加入药物）。 MTT 法检测最低无细胞毒药物浓度。各组细胞培养相应时间后，吸弃细胞上 清液，提取细胞总 RNA，通过实时定量 PCR 检测各组细胞中 TLR2、MyD88mRNA 的表达。 结果： 1.实时定量 PCR 各组 Ct 值表明，人阴道上皮细胞 VK2/E6E7 中构成性表达 TLR2 、 MyD88 mRNA。白色念菌热灭活孢子与 VK2/E6E7 共培养后，TLR2、MyD88mRNA 表达量呈升高趋势。共培养 12h 时，细胞 TLR2、MyD88mRNA 的表达量最高，与 空白对照组相比统计学具有极显著性差异（P0.01）；24h 后，表达量开始下降。 而 24h MyD88 mRNA 表达量与空白对照组相比，仍具有显著性差异（P0.05）。 2.洁泽 1 号、小檗碱、甘露聚糖对 VK2/E6E7 细胞的毒性实验： MTT 法检测药物细胞毒性：洁泽 1 号对 VK2/E6E7 的 IC10 为 14.7033mg/ml，作 用时间为 24 小时；小檗碱对 VK2/E6E7 的 IC10 为 6.1645μmol/L，作用时间为 12 小时；甘露聚糖对 VK2/E6E7 的 IC10 为 24.1823mg/ml，作用时间为 2 小时。 3.