结核分支杆菌与巨噬细胞相互作用的分子机理研究-生物学专业论文.docxVIP

缠彗坌塞枉苴与巨堕塑照相互作用的分子机理研究 缠彗坌塞枉苴与巨堕塑照相互作用 的分子机理研究 摘 要 (；i垫痘每年导致全球300万人死亡，是单个传染病中死亡率最高的一 种。目前全世界人口的三分之一受到结核菌感染，它的宿主细胞是单核吞噬细胞。 单核吞噬细胞被淋巴细胞激活后可杀灭细胞内的结核菌，但结核杆菌可以逃避宿 主细胞的杀伤在单核细胞、巨噬细胞内存活甚至繁殖[1]。目前有多种机制解释 结核杆菌在巨噬细胞内的存活机理，包括抑制吞噬体一溶酶体融合，抑制吞噬体 酸化，抵抗活性氮介质和活性氧介质的杀伤等。但对于结核杆菌产生这些效应的 分子机理以及宿主对抗这种致病的策略仍知之甚少／√ 为了更好的了解结核杆菌一巨噬细胞的相互作用机理，我们综合利用eDNA 芯片技术、蛋白质组学技术、选择性捕获转录技术(selective capture of transcribed sequences，SCOTS)等研究了结核杆菌与巨噬细胞相互作用的过程中 双方必蛋白的誊姿情况。f主要内容如下：／—＼ ， 1应用高密度cDNA芯片检测巨噬细胞U937感染结核杆菌H37Ra后的基 因表达谱。 结果发现结核杆菌感染导致463条差异表达基因，其中366条为基 因库中已登记过的已知基因。这些基因参与细胞的各种功能，包括信号传导，细 胞骨架重排，凋亡，转录调节，细胞表面受体以及细胞的代谢途径等。一些基因 对结核杆菌的感染及细胞内存活超重要作用。 2．应用高密度cDNA芯片研究结核杆菌耐链霉素菌株与H37Rv菌株感染巨 噬细胞后差异表达的基因。结果表明，两者诱导巨噬细胞的差异表达基因有53 条，耐链霉素菌株比H37Rv菌株更多的诱导某些趋化因子和细胞因子表达上调 条，耐链霉素菌株比H37Rv菌株更多的诱导某些趋化因子和细胞因子表达上调 和1L一10等表达下调。这提示，耐链霉素菌株与H37Rv菌株在诱导宿主的免疫 反应方面存在差异，耐链霉素菌株更容易遭到宿主细胞的免疫杀伤和清除。 3应用共聚焦显微镜及Western Blot技术观察未感染巨噬细胞、吞噬死 ‰Rv菌的巨噬细胞以及被结核杆菌H37Ra、H37Rv感染的巨噬细胞在感染后6h 、12h和24h纤丝状肌动蛋白(F一肌动蛋白)的形态分布及肌动蛋白表达变化。 发现结核杆菌H37Ra、H37Rv感染巨噬细胞后诱导宿主细胞F一肌动蛋白聚集并 抑制肌动蛋白的表达，有毒株H37Rv较无毒株H37Ra能更早的产生这种效应，而 吞噬死H37Rv菌的巨噬细胞肌动蛋白不受影响。结果表明结核杆菌在感染宿主细 胞的过程中，可能通过分泌某些蛋白或因子影响细胞的肌动蛋白，达到逃避宿主 细胞杀伤的目的。 4应用双向电泳技术分析耐异烟肼结核杆菌在与宿主细胞相互作用的过程 中蛋白合成的变化。结果明显发现有3种细菌蛋白在感染后24h表达增高，1种 蛋白表达下调。结果表明，结核杆菌在感染过程中可特异诱导和抑制某些蛋白的 表达，这些蛋白可能与细菌在细胞内生存与繁殖有关。 5应用SCOTS技术获得结核杆菌耐异烟肼菌株感染巨噬细胞后24h差异表达 的基因。这些基因需克隆测序以明确其身份。 、_／ 以圳研究表明，结核杆菌在与宿主细胞相互作用的过程中双方的基因或蛋 白表达发生了改变，深入研究这些基因和蛋白有助于微生物和宿主基因功能的研 究，而且有助于我们更好的了解和弄清微生物的童杰扭鎏和宿主的堕彻扭．理，为 感染性疾病的防治提供基础。 Study Study on the Molecular Mechanisms of Mycobacterium tuberculosis Interaction with Macrophages ABSTRACT Worldwide，tuberculosis causes nearly 3 million deaths per year,the higllest mortality rate of any single disease caused by infectious organism．Approximately one—third of the world’s population is thought to be infected with Mycobacterium tuberculosis，which Can resides within the macrophages of its host．Following activation by lymphocytes，macrophages serve as the final effectors in the killing of intracellular M tuberculos妇．Nevertheless，the pathogen