结核分枝杆菌PPE家族免疫相关蛋白PPE68免疫功能的研究-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

四川大学硕士学位论文 四川大学硕士学位论文 结核分技杆菌PPE家旗免疫相关蛋白PPE68免疫功能的研究 结核分枝杆菌PPE家族免疫相关蛋白PPE68 免疫功能的研究 硕士研究生： 王晓琳 导师：鲍 朗教授 中文摘要 结核病是由结核分枝杆菌所引发的一种传染病，近年来，随着 人口流动增加、多重耐药菌株的出现以及结核分枝杆菌与人类免疫 缺陷病毒(HIV)的联合感染，结核病对人类的健康形成日益严重 的威胁。卡介苗作为预防结核病的唯一疫苗，其保护效力却极不稳 定，因此越来越多的研究者致力于结核分枝杆菌疫苗的研制和开发 领域，如毒力基因的研究、疫苗候选基因的筛选及其编码产物免疫 原性与免疫保护性的研究、以及对卡介苗的改造等。 结核分枝杆菌是一种胞内致病菌，可以通过多种机制逃避机体 免疫细胞的杀伤及清除，从而在其宿主细胞——巨噬细胞中进行自 我复制和繁殖，并长期存活于机体内。当机体免疫能力下降时，潜 伏的结核杆菌就会大量繁殖而导致结核病的发生。 现已证明，RDl区基因编码的蛋白质是结核分枝杆菌的主要毒 力因子，在结核杆菌疫苗研制开发和检测诊断方面都受到了广泛的 重视。PPE68蛋白由RDl区的Rv3873基因所编码，是RDl区免疫 原性的重要组成部分之一，可以在结核感染病人体内诱发强烈的T 淋巴细胞反应。另外，PPE68做为PPE蛋白家族的成员，其特殊的 四川大学硕士学位论文 四川大学硕士学位论文 结核分枝杆菌PPE家族免疫相关蛋白PPE68免疫功能的研究 结构使其可能与结核分枝杆菌菌壁的高度疏水性及抗原变异有关， 并极有可能在结核杆菌的致病机制中起到至关重要的作用。 组织纤溶酶原激活物(tPA)是一种分泌表达的蛋白质，将其分 泌信号肽序列与目的DNA嵌合表达，可以增强后者所编码蛋白质 的分泌表达、有利于机体抗原递呈细胞对其的识别、处理及递呈， 从而诱导更强的体液免疫和细胞免疫应答的发生。 本研究将小鼠tPA分泌信号肽的eDNA与PPE68蛋白的编码基 因Rv3873进行嵌合，构建嵌合真核重组质粒pcDNA．t．Rv3873，在 体外转染BALB／C3T3细胞并获得稳定表达的基础上，免疫BALB／C 小鼠后检测免疫小鼠脾淋巴细胞体外诱导培养后的增殖活性，IFN— y产生水平以及CD4+和CD8+T淋巴细胞的增殖与CD4+／CD8+T淋 巴细胞比例的变化，并将其与peDNA3．1／Mye—His(+)及 pcDNARv3873免疫组的结果进行比较分析发现，pcDNA．t—Rv3873 免疫小鼠的脾淋巴细胞体外诱导培养后的增殖活性、IFN—Y产生水 平以及CD4+和CD8+T淋巴细胞的增殖及CD4+／CD8+T淋巴细胞的 比例变化均明显高于peDNARv3873及pcDNA3．I／1IIyc-His(+)免疫 组。该结果提示可能由于tPA分泌信号肽的存在使PPE68的分泌表 达增加，从而诱导了更强的细胞免疫应答的发生。 本研究比较系统的对PPE68蛋白的免疫功能及tPA分泌信号肽 序列对蛋白质分泌表达的影响进行了分析，为进一步研究整个PPE 蛋白家族的功能特点提供了重要的实验资料。 关键词：结核分枝杆菌；PPE蛋白家族；tPA；免疫功能 四川大学硕士学位论文 四川大学硕士学位论文 结核分枝杆菌PPE家族免疫相关蛋白PPE68免疫功能的研究 Immunological function of PPE68 of PPE protein family in Mycobacterium tuberculosis Graduate student：Wang，Xiaolin Tutor：Prof．Bao Lang Abstract Recent years tuberculosis have been the biggest killer worldwide in a11 of infectious diseases because of the widespead emergence of drug—resistant strains of Mycobacterium Tuberculosis and a deadly synergy with the human immunodeficiency virus(HIV)．Bacilli Calmette-Guerin(BCG)，a live，attenuated strain of Mycobacterium bovis，is currently the only available vaccine for the prevention of TB． However,it provides unstable protection against tuberc