结核分枝杆菌蛋白抗原b夹心ELISA方法的建立及其在结核性脑膜炎诊断中的应用-临床医学专业论文.docxVIP

第四军 第四军医大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 CSF Cerebrospinal fluid 脑脊液 HIV Human Immunodeficiency Virus 人类免疫缺陷病毒 -2- 结核分枝杆菌蛋白抗原b夹心ELISA 方法的建立及其在结核性脑膜炎诊断中的应用 硕士研究生：雷蕾 导 师：赵钢 教授 辅导老 师：宋朝君 副教授 第四军医大学西京医院神经内科，西安 710032 基金项目：陕西省科技统筹创新工程计划 中文摘要 背景 结核性脑膜炎（tuberculous meningitis. TBM）是一种最常见的神经系统结核病。 在肺外结核中大约有 5%～15%的患者累及神经系统，约占神经系统结核病的 70% 左右。近年来，由于人口流动频繁，免疫抑制剂的广泛、大量应用，耐药菌种的出 现及艾滋病（Acquired Immune Deficiency Syndrome.AIDS）患者的增多，不论是在 国内，还是在国外，结核病的发病率及病死率的趋势，都是在不断地逐渐增高。结 核病已经成为了我们目前需要迫切解决的重大问题，因其对我们全人类的健康造成 重大威胁，故成为全球关注的卫生问题，并成为部分相对比较落后的发展中国家和 经济条件差的部分地区，特别是在一些艾滋病高发地区（比如非洲部分国家和地区） 的人群中成为首要死因。因此越来越受到人们重视。抗原和脑脊液以其特有的优势， 作为检测对象成为我们研究的重点。酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay .ELISA）法，以其快速简洁、价格低廉、操作方便等优势成为我们选择的根 本原因。而单克隆 抗体 (monoclonal antibody.mAb) 和多克隆抗体 (polyclonal antibody.pAb)的制备，为我们检测抗原奠定基础。 -3- 目的 通过蛋白抗原 b（38kDa 抗原）单克隆抗体和多克隆抗体的制备，对单克隆抗 体的筛选，用双抗体夹心 ELISA 法，摸索包被时间、抗体浓度、优化条件等，从而， 建立定量检测脑脊液中结核分枝杆菌蛋白抗原 b（38kDa 抗原）的夹心 ELISA 法， 以期建立一种能够区分结核性脑膜炎活动性感染与潜伏性感染的方法。 方法 制备蛋白抗原 b（38kDa 抗原）的鼠源性单克隆抗体(mAb)及兔多克隆抗体 （pAb）；以单克隆抗体为包被抗体，多克隆抗体为检测抗体，建立检测结核分枝杆 菌蛋白抗原 b（38kDa 抗原）的双抗体夹心 ELISA；应用此方法检测正常人（n=6）、 非结核性脑膜炎患者（n=26）及临床确诊结核性脑膜炎患者（n=42）的脑脊液标本 中蛋白抗原 b（38kDa 抗原）的含量，并分析其与结核性脑膜炎活动性感染的相关 性。 结果 成功建立了检测蛋白抗原 b（38kDa 抗原）的夹心 ELISA 方法，敏感度可达 0.4 μg/L。应用该方法在正常人及非结核性脑膜炎患者脑脊液中未检测到蛋白抗原 b （38kDa 抗原）；在结核性脑膜炎患者脑脊液中蛋白抗原 b（38kDa 抗原）含量显著 升高。 结论 通过夹心 ELISA 方法检测结核分枝杆菌特异性抗原，为结核性脑膜炎的早期诊 断、治疗提供了可靠依据。由于抗原较抗体出现早，在脑脊液中较血清中更易检出， 建立了敏感、特异检测脑脊液中结核分枝杆菌蛋白抗原 b（38kDa 抗原）含量的 ELISA 方法，可用于检测脑脊液中的蛋白抗原 b（38kDa 抗原）水平，为活动性结核性脑 膜炎的早期诊断提供一种有效可行的手段。把结核性脑膜炎的诊断提高到一个新的 水平。 关键词：结核分枝杆菌蛋白抗原 b；结核性脑膜炎；单克隆抗体制备；多克隆抗体 制备；夹心 ELISA -4- Establishment of a sandwich ELISA method for quantitative detection of 38kd antigen and its application to diagnosis of Tuberculous meningitis Candidate for master : Lei Lei Supervisor : Zhao Gang Instructive teacher : Song Chaojun Department of Neurology,Xi Jing Hospital, Fourth Military Medical University, Xi’an 710032, China Abstract Background Tuberculous meningitis kills or disables roughly half of