酒石酸系列氨肽酶抑制剂的设计合成与活性研究-食品科学与工程专业论文.docxVIP

11111111111111111111111111111111111111111111111111 Y1850722 摘要 摘要 氨肤酶 N(APN ，又称CD13) 是含悴离子的…种膜结合型外肤酶，为依赖铮 离子的金属蛋白酶系列，在哺乳动物的小肠肾脏、中枢神经系统等组织中有广 泛表达。 APN 大量表达于肿瘤细胞表面，对肿瘤的血管生成、侵害具有重大的 作用。该酶降解细胞外基质的主要成分，从而促进肿瘤细胞在人体的转移和生 长:另还能够对许多免疫活性物质进行降解，削弱 NK 细胞和自噬细胞识别和杀 伤肿瘤细胞的能力，降低机体的免疫力。故抑制 APN 的活性可以控制对肿瘤肿 瘤细胞血管生成，同时增强粒细胞的趋化性，使机体的免疫力得以提高。 APN 巳被证明作为人体冠状病毒丁EGV 和 229E 病毒的受体。所有这些发现使 APN 的研究成为一个关注的目标，同时，近年来抗肿瘤药物研发的热点趋向于开发 高选择性、商效的的 APN 抑制剂。 基于结构基础的药物设计原理和对已知的类肤类 APN 抑制剂结构特征的分 析与总结，化合物与 APN 的结合部位可分为三个部分， A 部分是同 Bestatin 的 苯环相互作用的疏水口袋， B 部分是钵结合组(ZBG 型)， C 部分是另一侧疏水口 袋。通过对计算机辅助药物设计软件的应用设计新的药物，结合酶的晶体结构， 本研究设计并合成了酒石酸、苹果酸和烟酸三个系列共 40 个结构全新的化合物。 其化学结构由波谱分析 (IR、ESIMS 、lH NMR) 确认，所合成的目标化合物 经查阅文献证实，未见文献报道，均为新化合物。 对所合成化合物进行了体外抑酶实验，并对其活性作出初步评价。选择 APN 来对合成物进行筛埠，从而确定其酶活性的大小。其结果表明:本实验设 计合成的化合物中的大多数都对 APN 有抑制作用。实验结果表明， L-酒有酸系 列化合物对 APN 抑制活性最高，其半数抑制浓度(I Cso)达到微摩尔级，具有较高 抑隅作用。 本实验选用人红细胞白血病 K562 细胞对所合成的化合物进行抗肿瘤活性 筛选，利用 M1丁法间接测定各目标产物作用后肿瘤细胞增殖的变化，并计算出 肿瘤细胞的抑制率。并且，从所合成化合物选出四个肿瘤细胞抑制率较好的化 合物(川、 Bl 、Cl 、D2) ，计算出它们的半数抑制浓度(ICso) ，筛选出体外活性较 好的化合物 D20 关键词:氮肤酶 N抑制剂;合理药物设计:化学合成:抗癌活性 11 Abstract Abstract 1II 1II ABS丁RACT Arninopeptidase N (APN/ identical to CD13) belongsωa fami1y of zinc depen- dent exopeptidase has become an attractive target for structurebased drug，designing in the last decades. It was original1y used as a marker for the myeloid differentiation antigen.Aminopeptidase N (APN)is expressed on various mammalian cells including monocytes ，myeloid ，epithelial cells of the intestine and kidney，fibroblasts，endothelial cel1s and tumor cells. APN has been also proved to behave as a receptor for corona-viruses TEGV and 229E in humans .More impotant1y，many researches have shown 也at APN is involved in the regulation of tumour cell invasion and metastasis. In addition，APN is involved in the processes of immunological regulation; and 部 a result，many immunologic active materials have been degr dated and the ability of macrophage and NK cellsωidenti句r and kill 阳mbr cells have been weakened. All these findings