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精子DNA碎片指数与精液参数的相关性研究 【摘要】目的：探讨男性精子DNA碎片与精液常规参数及 精子顶体酶活性之间的关系。方法：收集生殖中心门诊553 例男性患者精液标本，采用改良精子染色质扩散实验（SCD） 检测精子DNA碎片指数（DFI）,按精子DFI结果分为DFK15% （I 组）、15%WDFI〈25% （II 组）、DFI225% （III 组），同时 检测精子密度、总数、（a+b）级精子百分率、畸形率及顶体 酶活性，对DFI与精液各项参数的相关性进行分析。结果： 精子密度及精子总数与DFI无显著相关性；前向运动精子百 分率随DFI升高逐渐降低，III组与I组间存在显著性差异; 精子正常形态率随DFI的增加有下降的趋势，但是差异不显 著；精子顶体酶活性随DFI升高而降低，组间均有显著性差 异。结论：精子DNA碎片指数与前向精子百分率及精子顶体 酶活性呈负相关。因此DFI可作为评估精子功能的一个较好 的参考指标。 【关键词】精子；DNA碎片；精液参数 【中图分类号】R167【文献标志码】A 以往，对于男性不育的诊断主要参考精液的密度、活动 率及精子形态等指标。这些参数只能解决精子质量和功能的 小部分问题，而对于评判精液的受精能力的作用相对较低 [1]。随着细胞生物学及分子生物学的发展，人们逐渐将关 注的重点转移到了精子的染色体上，并提出了精子DNA碎片 (DNA fragmentation)的概念。曾有研究者提出在射出的 精液中精子的DNA碎片率在10%?20%,且无论精液常规异常 与否，都有可能存在较高的精子DNA碎片率［2］。本研究采 用精子染色质扩散实验(Sperm Chromatin Dispersion, SCD) 的方法检测精液标本的精子DNA碎片率，分析其与精子密度、 精子活动率、精子形态及精子顶体酶之间的关系。 1材料与方法 1. 1研究对象 选择2012年9月1日至2012年12月31日在解放军第 一八一医院生殖中心就诊的553例男性作为研究对象，年龄 在24?41岁,所有患者禁欲3?7d,手淫方法收集精液标本, 在36°C温箱放置15?30min待其完全液化。 1. 2方法 取已液化的精液10 P L于精子计数板(Makier counting chamber,以色列，Sefi-medical Instruments)进行镜下 观察，记录精子密度，前向运动精子(a+b级)百分率；采 用Diff-quick法进行标本染色，在100X油镜下观察；精子 顶体酶活性使用深圳华康生物医学工程有限公司精子顶体 酶活性定量检测试剂盒(改良Kennedy法)进行检测；精子 DNA碎片使用深圳博锐德生物科技有限公司SpermFunc DNAf 精子DNA碎片检测试剂盒(SCD法)进行检测。按照WHO《人 类精液检查与处理实验室手册》(第5版)将25%定为精子 DNA损伤的正常临界值。本研究将553份精液标本分为3组。 I组：精子DNA碎片偏低组(DFI15%)； II组：精子DNA碎 片偏高组(15%WDFI〈25%)； III组：精子DNA碎片异常组 (DFI225%)。将3组精液的精子密度、总数、(a+b)级精 子百分率、畸形率及顶体酶活性进行比较分析。 1.3统计学分析 使用SPSS 17. 0统计软件对结果进行分析。 3讨论 精子染色质不论是在组成还是在结构上都与体细胞有 很大不同。替代组蛋白成为精核蛋白的鱼精蛋白(HP)和大 量的二硫键使精子染色体高度浓缩，这种特化的结构可以保 护精子DNA免受伤害，因此成熟精子对各种致病因素有较强 的抵抗力。DNA修复发生在精子生成过程中，当完成DNA的 转录及翻译而形成精子后，DNA的修复就已完成［3］。 精子DNA碎片有可能来源于生精过程和后生精过程［4］ o 在正常的精子发生过程中，染色质的组装需要内源性核酶 (拓扑异构酶II)参与，以建立和连接DNA缺口，有助于组 蛋白被鱼精蛋白替换过程中释放扭力(torsional stress) 和染色质重组［5］。各种原因导致的精子鱼精蛋白含量降低, 二硫键形成障碍，均可能导致染色体浓缩异常，进而导致DNA 出现碎片化。精子生成后，在男性生殖道的储存及运输过程 中，过高的白细胞可刺激人类精子产生活性氧（ROS）类物 质。这种刺激可以通过细胞-细胞接触或白细胞产生的可溶 性产物等多种途径介导［6］,也可能是白细胞通过瀑布样机 制增加精子的原发性DNA损伤，并诱发潜在DNA损伤，在形 态差、活力低的精子中尤其如此［7］。部分疾病在发病过程 中也可以出现精子DNA的损伤。精索静脉曲张的不育患者表 现出明显的精子DNA损伤。DNA碎片的增高可能是由于迂曲 扩张的精索静脉血管使睾丸、附睾等局部血液回流速度变 慢，长期以后则对睾丸和附