标本处理对聚合酶链反应测定乙肝病毒核酸的影.doc

PAGE PAGE 1 标本处理对聚合酶链反应测定乙肝病毒核酸的影 【摘要】　目的　研究对血清标本进行乙型肝炎病毒（HBV）DNA聚合酶链反应（PCR）测定前的最佳标本处理方法。方法　使用煮沸裂解方法和核酸纯化方法同时处理2份HBVDNA含量不同血清标本及3份溶血和正常血清标本，比较荧光定量PCR测定的重复性及测定值的差异。结果　煮沸裂解法处理2份标本所得结果的重复性（变异系数CV分别为0.2165和0.3262）明显差于对样本进行核酸纯化后的测定重复性（CV分别为0.0699和0.1092）；并且，当标本中血红蛋白含量大于5.89μg/L时（肉眼未见有明显溶血），采用煮沸裂解法处理标本所得HBVDNA量较核酸纯化方法所得值低约2个数量级（P＜0.05）。结论　在HBVDNAPCR检测时，煮沸裂解法不适合用来处理血清标本，而应使用核酸纯化方法。InfluenceofnucleicacidextractionfromserumwithtwomethodsonHBVDNAdetectionbyfluorescencequantitativePCR(TaqMan) LIJinming　WANGLunan　DENGWei 　　（NationalCenterforClinicalLaboratory,Beijing100730,China） 　　【Abstract】　Objective　ToinvestigatetheinfluenceofnucleicacidextractionbyboilingtheserumsamplesandpurifingnucleicacidfromserumonHBVDNAdetectionbyPCR.Methods　TheDNAtemplatesfrom2serumsampleswithdifferentHBVDNAconcentrationand3serumsampleswithhemolysisandnon-hemolysisforPCRwerepreparedbytwokindsofmethod,i.e.byboilingtheserumtoreleaseHBVDNAfromthevirusparticlesandbypurifingthenucleicacidfromserum.Then,thedifferenceofreproducibilityandHBVDNAquantitativevaluesbyPCRusingthetemplatespreparedbythetwonucleicacidextractionmethodswascompared.Results　HBVDNAquantitativevaluesbyPCRusingthetemplatespurifiedfromthetwosamplesweremorereproducible(CV:0.2165and0.3262,respectively)thanthoseusingthetemplatespreparedbyboilingtheserum(CV:0.0699and0.1092,respectively).Moreover,whentheconcentrationofhemoglobininserumsampleswashigherthan5.89μg/L,theHBVDNAquantitativevaluesbyPCRusingthetemplatespurifiedfromthesampleswereaboutone-hundred-foldmorethanthoseusingthetemplatespreparedbyboilingtheserum(P＜0.05).Conclusion　TheresultssuggestedthattheDNAtemplatepreparedbyboilingtheserumisnotsuitableforHBVDNAquantitativePCRdetection,andnucleicacidforPCRmustbepurifiedfromserum. 　　【Keywords】　Polymerasechainreaction;Specimenhandling;DNA,viral 　　乙型肝炎病毒（HBV）DNA的定量测定在乙型肝炎病人的临床治疗监测中有重要参考价值，其前提是定量必须具有很好的重复性。目前国内用于HBVDNA定量测定的方法基本上是荧光定量聚合酶链反应(PCR,TaqMan)技术，这种实时测定技术方便简单，且不易引起污染。影响PCR测定重复性和准确性的因素，除了PCR扩增本身以外，还有一个常被忽略但也非常关键的因素，即标本处理。目前，国内绝大部分用于HBV