网织红细胞计数方法.doc

PAGE PAGE 1 网织红细胞计数方法 网织红细胞生理概要 网织红细胞是未完全成熟的红细胞。红细胞由骨髓进入外周血，需24-48h合成最后20％的血红蛋白，残余的嗜碱性物质才能完全消失，成为成熟的红细胞。将其分为五型：花冠型、丝球型、网型、破网型、点粒型。 血球分析仪器法 仪器型号：SysmexXE-2100型多项目自动血球分析装置 检测原理： 一份血液样品经过吸液和定量、稀释至指定的稀释比，并进行染色。然后将该样品送入流动的池中。一个半导体激光束通过流动池照射到细胞上。前向散射光由光二极管接收，侧面的散射光和侧面的荧光则由光点信增管（PMT）接收。光信号被转化为电脉冲，从而可以得到有关血液细胞的信息。 ⑴前向散射光和侧向散射光：当光通路中存在诸如粒子之类的障碍物时，该光束就在每个障碍物的不同方向上产生出散射光。通过检测散射光，可以得到有关细胞体积大小和材质的信息。与此同时，当一束激光照射到血细胞颗粒上时，就产生光散射。散射光的强度，取决于颗粒直径和观察角度这样的因素。对前向散射光进行检测，提供有关血液细胞体积大小的信息；同时对侧向散射光进行检测，提供有关细胞内部的信息。 ⑵侧向荧光：当光照射到经过荧光染色的血液细胞上时，就产生比入射光波长更长的光。随着染色集团浓度的增加，荧光强度也增加。通过测量荧光强度，可以得到有关血细胞染色的信息。 试剂： ⑴CELLPACK（EPK） ⑵RETSEARCHⅡ（RED） 标本吸入量： ⑴手工模式130 ⑵自动进样器模式200 静脉血采血方法： 抽取病人静脉血2ml，于EDTA二钾抗凝的真空采血管中（1.5mgEDTA-K2／ML）24小时室温保存。 操作步骤： ⑴当机器经过电源接通和一系列自检无误后，在机器左上放状态栏显示ldquo;READYrdquo;及确认ldquo;READYLEDrdquo;（准备状态灯）呈绿色时，机器进入准备测量状态。 ⑵要在允许空白值内： WBC RBC HGB PLT 0.3109/L 0.021012/L 1g/L 10109/L ⑶检测质控数值合格。 ⑷标本的测量： 手工模式：在准备测量状态下，按下屏幕最上一行MANUAL键，利用数字键输入标本的编号，按ENTER键确认。将待测标本充分混均，然后将吸液管放进待测标本试管中并按下开始键。吸液管吸液完毕后听到三声报警声，将试管移开。 进样器自动模式：在准备测量状态下，按下屏幕最上一行MANUAL键，利用数字键输入标本的编号，按ENTER键确认。将试管加放在自动进样器工作台上。机器开始自动混均、吸引和分析标本。 ⑸结果显示：标本被吸入后仪器将进行自动测量，被测标本的结果自动显示出来。同时屏幕切换至ldquo;准备测量rdquo;状态，此时可进行下一份标本的测量。 显微镜计数法 细胞受色原理： 网织红细胞较成熟的红细胞稍大，胞浆中残存多少不等的嗜碱性物质，经煌焦油蓝、新亚甲蓝或硫酸奈尔蓝活体染色呈浅蓝或深蓝色的网状结构。 试剂： 10g/L煌焦油蓝等渗盐水溶液：煌焦油蓝1g、枸櫞酸钠0.4g、氯化钠0.85g、蒸馏水加至100ml。 操作步骤： ⑴于玻片的一端加10g/L煌焦油蓝等渗盐水溶液一滴，任其自然干燥备用。 ⑵取末梢血一滴于干燥染料上，用推片搅动混匀后，将两玻片盖合，待3min以上时间，才推制血片。 ⑶油镜下，计数1000个红细胞中的网织细胞数。 正常参考值　成人：0.5-1.5％ 24109/L-84109/L 儿童：3-6％ 临床意义 网织红细胞显著增加，表示骨髓红细胞生成旺盛，常见于溶血性贫血（可高达70％）。为其次急性失血性贫血，急性失血后5-10天达到高峰，2周后恢复正常。营养性巨幼红细胞性贫血和缺铁性贫血可因缺乏造血物质，仅轻度增加（也可正常或减少）。 网织红细胞数量持续上升，常提出慢性失血，如消化道溃疡等。 贫血治效果观察，如缺铁性贫血和营养性巨幼红细胞性贫血，经相应治疗后1-2日开始增多，1周左右达到最高峰，因此观察网织红细胞数量的反应，是贫血疗效的评价指标。 骨髓受白血病、肿瘤等浸润时，血中网织红细胞也可呈不规则的病理性轻度增多，此系病理刺激所至，它不反应造血旺盛。 网织红细胞减少，表示骨髓红细胞生成减弱。主要见于再生障碍性贫血，临床上将贫血病人每升血液中网织红细胞浓度数低15109/L作为急性再生障碍性贫血的诊断标准。