左乙拉西坦逃避P―糖蛋白药理学机制探究.docxVIP

左乙拉西坦逃避P—糖蛋白药理学机制探究 摘要：目的 初步探讨左乙拉西坦逃避P-糖蛋白的药 理学机制。方法30例诊断明确的难治性部分性癫痫患者根 据随机、双盲、安慰剂对照原则，随机接受抗癫痫药物左乙 拉西坦添加治疗或安慰剂治疗。采用聚合酶链反应-限制性 片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测基因型。结果CC基 因型受试者中，左乙拉西坦治疗组9例，1例癫痫发作完全 控制，3例显效，2例有效，发作减少50%的有效率为6/9； 安慰剂组7例中仅1例有效，发作减少50%的有效率为l/7o 结论 左乙拉西坦添加治疗CC基因型的难治部分性癫痫患者 疗效良好，可能与其逃避了 P-糖蛋白的外排作用有关。 关键词：左乙拉西坦；P-糖蛋白；药理学；癫痫 目前认为，难治性癫痫的耐药性主要与多药耐药基因1 (multidrug resistance genel, MDR1)中 CC 基因型及其 所编码的P-糖蛋白有关。左乙拉西坦是一种新型抗癫痫药 物，添加治疗难治部分性癫痫发作有效且安全，其一药理学 机制可能是左乙拉西坦逃避MDR1中CC基因型编码的P-糖 蛋白的外排作用，进入致痫灶而发挥抗癫痫作用。本研究就 这一药理学机制进行初步探讨。 1资料与方法 1. 1 一般资料30例受试者均来自2006年3月?2007年 11月天津医科大学总医院神经内科癫痫门诊。 1.2纳入标准①获得受试者签署的知情同意书；②男性 或女性受试者，年龄18?65岁；③根据国际抗癫痫联盟 （Inter nati onal League Agains t Epilepsy, I LAE）分类 标准确诊为部分性癫痫无论有无继发性全身发作者，病史为 6个月以上；④回顾基线阶段的8w内应出现至少8次部分性 癫痫发作；⑤筛选访视前，受试者持续、稳定、规范服用至 少3个月1?4种其他抗癫痫药物。 1.3排除标准 ①正在妊娠或哺乳期的妇女；②有其他严 重的器质性疾病、精神病以及神经系统进行性或变性疾病 者；③基线期存在异常实验室指标；④有酒精或其他药物成 瘾史或滥用史者；⑤既往治疗依从性不良者；⑥筛选访视前 3个月内有癫痫持续状态病史者。 1. 4方法 1.4. 1试验药品左乙拉西坦和安慰剂均为外观、形状、 颜色基本一致的片剂，采用相同包装。试验药物左乙拉西坦 片（250mg/片）、安慰剂（左乙拉西坦空白 模拟片）均由珠海联邦制药股份有限公司中山分公司提 供。 1. 4. 2试验设计30例受试者在进入临床研究之前采取 肘静脉血加1以备基因型检测。采用随机、双盲、安慰剂对 照添加治疗研究方法，设置左乙拉西坦添加治疗组和安慰剂 组，样本比例为2 : 1,研究流程如图1所示。①回顾性基线 期：详细询问和判断患者接受添加治疗前8w内（回顾性基 线期）癫痫发作的类型及发作频率，记录神经影像学、脑电 图及其他实验室检查结果，以及抗癫痫药物的使用情况；② 逐量加药期：两组受试者随机接受试验药品左乙拉西坦或安 慰剂，初始剂量为0. 50g 口服，2次/d亦即1. 00g/d； 2w后 药物剂量增加为l.OOg 口服，2次/d即2. OOg/d；再2w后增 至1. 50g, 2次/d即3. OOg/do药物加量期共为4w；③剂量 维持期：达到上述剂量后稳定服药，维持治疗12w；④逐量 减药期：在此期间内，药物剂量逐渐递减至l.OOg, 2次/d 即2. OOg/d； 2w后减至0. 50g, 2次/d即1. OOg/d,共治疗 20wo受试者在每次访视时必须返还所有未服用药物，根据 核查剩余药品数量评估患者的依从性。 1.4.3基因型检测 ①外周血基因组DNA提取：树脂型基 因组TM DNA提取试剂盒（包括纯化树脂、GN结合液、漂洗 液和离心纯化柱）由北京赛百盛基因技术有限公司提供。转 移0. 50ml全血至1ml纯化树脂中，利用纯化树脂吸附DNA, 以1.00ml GN结合液和0. 50ml漂洗液漂洗纯化树脂；在离 心纯化柱中用0. 80ml无水乙醇脱水，再以TE缓冲液洗脱纯 化树脂，洗脱下来液体即为基因组DNA；②聚合酶链反应- 限制性片段长度多态性检测：反应总体积为25ul, DNA模 板约为 100ng, DNA buffer 2.50 pl, Tag 酶 1.25U, dNTP3. 80mmol （均由南京田境公司提供）。引物各lOpmol （南 京金思特科技有限公司），其中上游引物为： 5-ACTCTTGTTTTCAGCTGCTTG-3 ； 下游引物： 5 -AGAGACTTACATTAGGCAGTGACTC-3。PCR 反应条件为 94 °C 预变性5min,然后9QC变性30s, 58°C复性20s, 72°C延伸 30s,共进行33个循环，最后72°C再延长5mino 10 u 1 P