实践应用巢式PCR检测葡萄根癌病菌.pdfVIP

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62 江苏农业学报(JiangsuJ.of Agr.Sci. ),2011,27(1):62~65 樊金娟,王摇 平,刘长远,等. 应用巢式PCR检测葡萄根癌病菌[J].江苏农业学报,2011,27(1):62鄄65. 应用巢式PCR检测葡萄根癌病菌 1,2 1 2 2 3 樊金娟 ,摇 王摇 平 ,摇 刘长远 ,摇 赵奎华 ,摇 邢荆涛 (1.沈阳农业大学生物科学技术学院,辽宁 沈阳 110161;2.辽宁省农业科学院植物保护研究所,辽宁 沈阳 110161; 3.河北 省保定市唐县第一中学,河北 保定 072350) 摇 摇 摘要:摇 为建立葡萄根癌病菌的分子检测方法,应用细菌核糖体基因间隔片段(16S~23S ribosomal DNA inter鄄 genic spacer,ITS)通用扩增引物1405f/ 456r和葡萄根癌病菌ITS特异引物fI/ rI,采用巢式PCR(Nested鄄PCR)技术对 2株葡萄根癌病菌[即葡萄土壤杆菌(Agrobacteriumvitis)]和10株非葡萄根癌病菌进行扩增,并且对接种葡萄根癌 病菌的葡萄植株进行检测。 结果表明,仅有葡萄根癌病菌能扩增出1条长度为607 bp 的片段;巢式PCR检测方法 可从接种15 d后的葡萄植株中特异性检测出病原菌,而病症的出现需要30~35 d 的时间。 说明该研究建立的巢式 PCR方法可用于快速检测葡萄根癌病菌。 关键词:摇 细菌核糖体基因间隔序列; 葡萄根癌病菌; 巢式PCR; 分子检测 + 中图分类号:摇 S436.631.1 6摇 摇 摇 文献标识码:摇 A摇 摇 摇 文章编号:摇 1000鄄4440(2011)01鄄0062鄄04 Detection ofAgrobacterium vitis by nested鄄PCR 1,2 1 2 2 3 FANJin鄄juan ,摇 WANG Ping ,摇 LIU Chang鄄yuan ,摇 ZHAO Kui鄄hua ,摇 XINGJing鄄tao (1.College of Biological Science Technology,ShenyangAgricultural University,Shenyang 110161,China;2.Instituteof PlantProtection,LiaoningA鄄 cademy of Agricultural Sciences,Shenyang 110161,China; 3.No.1Middle School of Tangxian,Baoding 072350,China) 摇 摇 Abstract:摇 Agrobacterium vitis,which causes crown gall,was detected by nested鄄PCR using primer pairs 1405f/ 456r andfI/ rI. A bandof607 bpwasamplifiedfromtwoAgrobacteriumvitis strainsbut notfrom other 10 non鄄Agrobacteri鄄 um vitis strains. Thepathogenicbacteriacouldbedetectedbynested鄄PCRtechniquefrominoculatedindividualsatday 15, while symptoms could be observed at about day35. The results of field detection also recommendedthat nested鄄PCRtech鄄 nique could be used in quickly earlier detection of crown gall. Key words:摇 intergenic spacer(ITS);Agrobacteriumvitis; nest

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