家蚕bmo-miR-34对BmE74基因表达的调控.pdfVIP

江苏农业学报（ＪｉａｎｇｓｕＪ．ｏｆ Ａｇｒ．Ｓｃｉ．），２０１６，３２（１）：５１～５７ ｈｔｔｐ：／ ／ ｗｗｗ．ｊｓｎｙｘｂ．ｃｏｍ ５１ 王　 欣，范洋洋，陈　 晨，等． 家蚕ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４对ＢｍＥ７４基因表达的调控［Ｊ］．江苏农业学报，２０１６，３２（１）：５１⁃５７． ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１０００⁃４４４０．２０１６．０１．００８ 家蚕ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４对ＢｍＥ７４ 基因表达的调控 １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ 王　 欣 ，　 范洋洋 ，　 陈　 晨 ，　 谢雨辰 ，　 蒋　 涛 ，　 汪生鹏 ，　 沈兴家 （１．江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑生物学与生物技术重点实验室，江苏 镇江 ２１２０１８； ２．中国农业科学院蚕业研究 所，江苏 镇江 ２１２０１８） 　 　 摘要：　 为了研究家蚕ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４（一类高度保守的ｍｉＲＮＡ）对Ｅ７４基因（ＢｍＥ７４）的表达调控作用，首先利用 生物信息学软件ＲＮＡｈｙｂｒｉｄ和ＲＮＡ２２进行结合位点预测，然后从家蚕丝腺组织中克隆了ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４前体序列，分 别构建ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４表达载体和靶基因ＢｍＥ７４ ３′ＵＴＲ重组表达载体，利用双报告基因荧光检测系统在细胞水平研 究ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４对ＢｍＥ７４基因的转录后调控作用。 生物信息学预测结果表明，ＢｍＥ７４ ３′ＵＴＲ具有ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４潜在 结合位点；体外转染试验结果显示，与对照相比，转染 ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４ 重组质粒的细胞荧光素酶活性极显著下调（Ｐ＜ ００１），但是当加入人工合成的ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４ 抑制物后荧光素酶活性显著上调（Ｐ＜００１）。 说明ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４ 对 ＢｍＥ７４ 的转录后表达具有抑制作用。 关键词：　 ｍｉＲ⁃３４； 家蚕； ＢｍＥ７４基因； 表达调控 中图分类号：　 Ｓ８８１．２；Ｑ７８　 　 　 文献标识码：　 Ａ　 　 　 文章编号：　 １０００⁃４４４０（２０１６）０１⁃００５１⁃０７ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＢｍＥ７４ ｇｅｎｅ ｂｙ ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４ ｉｎＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ ＷＡＮＧＸｉｎ ，　 ＦＡＮＹａｎｇ⁃ｙａｎｇ ，　 ＣＨＥＮ Ｃｈｅｎ ，　 ＸＩＥ Ｙｕ⁃ｃｈｅｎ ，　 ＪＩＡＮＧＴａｏ ，　 ＷＡＮＧ Ｓｈｅｎｇ⁃ｐｅｎｇ ， ＳＨＥＮＸｉｎｇ⁃ｊｉａ１，２ （１．ＪｉａｎｇｓｕＫｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｓｅｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ ２１２０１８，Ｃｈｉｎａ； ２．ＳｅｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ ２１２０１８，Ｃｈｉｎａ） 　 　 Ａｂｓｔｒａｃｔ：　 Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４ （ａ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｍｉＲＮＡ） ｏｎＢｍＥ７４ ｇｅｎｅ ｉｎＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ，ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｓｏｆｔｗａｒｅｓ ＲＮＡｈｙｂｒｉｄ ａｎｄ ＲＮＡ２２ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｉｎＢｍＥ７４ ３′ＵＴＲ． Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ａｆｔｅｒｗａｒｄｓ，ａｎｄ ｂｍｏ⁃ｍｉＲ⁃３４ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ａｎｄ