实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON88017.pdfVIP

江苏农业学报（ＪｉａｎｇｓｕＪ．ｏｆ Ａｇｒ．Ｓｃｉ．），２０１６，３２（５）：９９２～９９８ ９９２ ｈｔｔｐ：／ ／ ｗｗｗ．ｊｓｎｙｘｂ．ｃｏｍ 宋　 君，王　 东． 实时荧光定量ＰＣＲ检测转基因玉米ＭＯＮ８８０１７［Ｊ］．江苏农业学报，２０１６，３２（５）：９９２⁃９９８． ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１０００⁃４４４０．２０１６．０５．００６ 实时荧光定量ＰＣＲ检测转基因玉米ＭＯＮ８８０１７ 宋　 君，　 王　 东 （四川省农业科学院分析测试中心，四川 成都 ６１００６６） 　 　 摘要：　 为完善中国转基因生物及产品定量分析标准化技术体系，保障中国生物安全和降低生态风险，本研究 建立了转基因玉米ＭＯＮ８８０１７及产品的实时荧光定量ＰＣＲ分析方法，并用特异性、准确度、灵敏度以及测量不确定 度等指标评价了该方法。 结果显示该方法分析转基因玉米ＭＯＮ８８０１７特异性很强；２９次重复测量含量为１５０％的 转基因玉米ＭＯＮ８８０１７样品，平均测量值（１５４１％）接近真实值（１５０％），相对偏差为２７０％，测量值的变异系数 为０１１０４，回收率为１００００％，测量不确定度为００９６；在９７５％的置信水平下能检测到最低含量为５个拷贝的 ＭＯＮ８８０１７分子片段。 因此，本研究建立的转基因玉米 ＭＯＮ８８０１７实时荧光定量ＰＣＲ方法具有较高的特异性、准 确度和灵敏度，能为中国转基因生物安全监管提供良好的技术支撑。 关键词：　 转基因玉米ＭＯＮ８８０１７； 实时荧光定量ＰＣＲ； 特异性； 灵敏度； 精确度； 测量不确定度 中图分类号：　 Ｓ５１３０３５３　 　 　 文献标识码：　 Ａ　 　 　 文章编号：　 １０００⁃４４４０（２０１６）０５⁃０９９２⁃０７ Ａ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉ⁃ ｆｉｅｄ ｍａｉｚｅ ＭＯＮ８８０１７ ＳＯＮＧＪｕｎ，　 ＷＡＮＧ Ｄｏｎｇ （Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ，ＳｉｃｈｕａｎＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１００６６，Ｃｈｉｎａ） 　 　 Ａｂｓｔｒａｃｔ：　 Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｃｏｍｐｅｎｓａｔｅａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄｔｅｃｈｎｉｃａｌ ｓｙｓｔｅｍｓｏｆ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｅｓｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉ⁃ ｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ （ＧＭＯｓ） ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔ Ｃｈｉｎａ′ｓ ｂｉｏ⁃ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅ ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｉｓｋ， ａ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｆｏｒ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ （ＧＭ） ｍａｉｚｅ ＭＯＮ８８０１７ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙ ｓｅｖｅｒａｌｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｄｉｃｅｓｓｕｃｈａｓｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ａｃｃｕｒａｃｙ ａｎｄｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｕｎ⁃ ｃｅｒｔａｉｎｔｙ． Ｔｈｅ ｍｅａｎ ｖａｌｕｅ ｏｆ ＧＭ ｍａｉｚｅ ｃｏｎｔｅｎｔ （１５４１％） ｒｅｐｅａｔｅｄｌｙ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｆｏｒ ２９ ｔｉｍｅｓ ｗａｓ ｃｌｏｓｅ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅａｌ ｖａｌｕｅ （１５０％）ｗｉｔｈｔｈｅｖａｒｉａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ０１ａｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｄｅｖｉａｔｉｏｎｏｆ２７０％．Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓａｎｄｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｕｎｃｅｒ⁃ ｔａｉｎｔｙ ｗｅｒｅ １００００％ ａｎｄ