海洋动物精子和胚胎的超低温保存研究-渔业资源专业论文.docx

海洋动物精予和胚胎的超低温保存研究摘 海洋动物精予和胚胎的超低温保存研究 摘 要 本研究对花鲈和红鳍东方纯的精子以及杂色蛤、太平洋牡蛎的胚胎及幼虫 进行了超低温保存实验，确定了其最佳保存条件和方法，并对造成精子超低温冷 冻损伤的原因进行了探讨。 对花鲈(Lateolabraxjaponicus)精子的超低温冷冻研究发现，采用15％ 甘油十5％蔗糖+5％葡萄糖的抗冻液配方，冻精复活率可达到86．5％：离体精子活 率在前2h内下降缓慢，3h后活率下降为50．0％；甘油的最佳添加浓度为15％； DMSO的最佳添加浓度为lO％；甘油对精子的保护效果好于DMSO；快速解冻法好 于慢速解冻法。 对超低温冷冻前后的红鳍东方鱿(Taki如∥，曲ripes)精子超微结构的观 察发现，受冷冻损伤精子的被膜膨胀、破裂、脱落；线粒体内嵴变形，结构模糊， 甚至脱落；鞭毛在基部或主段、末段断裂，或被膜膨胀脱落。结果表明，经超低 温保存后，膜结构损伤、线粒体脱落和鞭毛轴丝断裂是导致红鳍东方纯精子活力 下降的主要原因。 对杂色蛤(Rudetapes variegata)胚胎和幼虫的超低温冷冻保存发现，杂 色蛤囊胚和面盘幼虫的保存复活率显著高于担轮幼虫和D形幼虫的复活率 (P(O．05)：杂色蛤囊胚的解冻复活率达42．3％(4．OM DMSO)，相同DMSO浓度 条件下，高蔗糖浓度组保存效果好于低蔗糖浓度组，但差异不显著(PO．05)； 在相同蔗糖浓度条件下，抗冻液中DMSO浓度较高组的保存效果好于DMSO浓度较 低的组，但差异不显著(PO．05)。 对太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)的胚胎和幼虫的超低温冷冻保存发现， 担轮幼虫的解冻复活率最高，达61．1％(3．OM DMSO)，显著高于其他发育阶段 幼虫的保存结果(PO．05)；牡蛎担轮幼虫的保存结果显示，在相同DMSO浓度条 件下，高蔗糖浓度组保存效果好于低蔗糖浓度组，但差异不显著(P0．05)。 关键词：超低温保存；花鲈；红鳍东方纯；杂色蛤；太平洋牡蛎；精子；胚胎 Cryopreservation Cryopreservation of marine animal gametes and embryos AbStract In the present paper,to develop simple．reliable and efficient methods for cryopreservation are reported． Survival rate of 86．5％was obtained in cryopreservation of the spermatozoa of seabass Lateolabrax japonicus．The prescription of the best antifreeze solution are glycerol 1 5％+sucrose 5％+glucose5％．The motility of fresh spermatozoa descends slowly within the former 2 hours and it is 50 0％at the third hour．The better density of glycerol and DMSO are 1 5％and 1 0％．The antifreeze effect of glycerol is better than that of DMSO．The effect of quick thawing is significantly better than that of slow thawing The ultrastructure of Takifugu rubripes spermatozoa before and after cryopreservation was studied by means of ultrathin—section TEM technique．The results indicate that cryodamage may cause the membrane of sperm head swelling or disintegrating，the abnormality of the head，the transmutation of mitochondria，the IOSS ofmitochondria． After cryopreservation of embryo and larvae of manina clam Ruditapes variegata，the results indicate the survival r