课件：毛细管电泳.ppt

质谱联用 　　　Olivares，Smith和Henion等分别在1987-1988年提出毛细管电泳-质谱联用（CE-MS）技术，在CE中，紫外检测器由于通过样品的光程较短导致灵敏度较低，特别对一些紫外吸收较弱的化合物的检测。近年由于大气压电离（API）、电喷雾电离（ESI）及新型质谱仪的快速扫描等新技术的出现，足以满足CE窄峰形的特点，使得CE-MS，CE-MS-MS均得到快速发展，并正在成为实验室的重要常规分析方法之一。 　　　质谱检测器有如下特点： 　　　1）与紫外，激光诱导荧光和电化学检测器相比，更是一种通用型检测器； 　　　2）由于质谱的选择性和专一性，弥补了样品迁移时间变化的不足； 　　　3）质谱检测的灵敏度优于紫外分光光度法； 　　　4）质谱在检出峰的同时还能给出分子量和结构信息； 　　　5）某些质谱技术可以给出多电荷离子，对分析大分子如糖，蛋白质等与CE联用更有利。 展望 　　　CE技术的研究和应用，给药物分析领域和药品检验工作带来了生机与活力，无疑将对该专业技术的发展及提高起着重要的推动和促进作用。尤其以对基因工程药物、中成药复方制剂的分析和中药材种属的鉴定，令人瞩目。但任何事物都有两面性，它也有弱点和不足，如有的药物用CE分析精确度还不够高；有的灵敏度很高，但专属性界定尺度又不易掌握；CE仪器昂贵，很难普遍推广等等，都需要不断研究解决。尤其以如何巧妙地与其它方法和技术（如HPLC、MS等）联合使用，以收到更好的效果，是今后CE技术研究、完善的方向和课题。可喜的是，这方面的工作已开始启动，CE一HPLC、CE一MS联用己取得高效率、高质量的分析成果。经过科学工作者的不懈努力，一个药物分析领域的新技术快速发展时期即将到来。 谢谢 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 毛细管电泳： 是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。 粒子在电场的作用下，以不没的速度向电荷反方向迁移和现象，是一种在空芯、微小内径的毛细管（内径10~200um）中进行的大、小分子的高效分离技术，毛细管两端分别浸入缓冲液中分别插入连有高压电源的电极，该电压使得分析样品沿毛细管迁移，根据被分离物之间电荷和体积的不同，各种分子在高电压下被分离，在自由区带毛细管电泳中，电泳的移动（带电荷分子朝相反极性的电极方向移动）和电渗流（在毛细管内壁上的电荷和应用的势能而引起的电解质移动）导致了分离。 电渗流的大小取决于电场强度、电解质的PH、缓冲液的组成和离子强度、内磨擦和毛细管表面的等特点，这些因素能单一或互相结合地提高分离效果，检测可使用UV直接通过毛细管上的小窗口进行检测，也可选择激光诱发荧光、二极管阵列、电化学和质谱检测器检测。样品进样方式是应用气压或电压将样品压入毛细管中完成。高效毛细管电泳具有多样化分离模式，其分离的机理是不同的，它们之间具有相互补充的作用。 二、毛细管电泳的分离模式 毛细管区带电泳（Capillary Zone Electroporesis，CZE） 分离原理：毛细管区带电泳出称为自由溶液毛细管电泳，是毛细管电泳是最简单的一种形式。其分离机理是基于各被物质的净电荷与质量之间比值的差异，不同离子按照各自表面电荷密度的差异，以不同的速度在中解质中移动而导致分离，它要求缓冲液具有均一性，毛细管内各处具有恒定的电场强度，是目前应用最广的一种分离模式。适用于蛋白质、氨基酸、多肽类和离子的分析。毛细管中除电解液外，无需填充任何物质，操作容易，自动化程度高。 毛细管凝胶电泳（Capillary Gel Electrophoresis，CGE） 分离原理：凝胶电泳是凝胶移到毛细管中用为支撑物进行分离的区带电泳。凝胶是一种固态的分散的体系。具有多孔性，类似于分子筛的作用，被分离物在通过装入毛细管内的凝胶力，按照各自分子的体积大小逐一分离，分子体积大的首先被分离出来，适用于生物大分子的分析，可纯粹按分子体种大小进行分离（SDS），以决定蛋白质的分子量，可以识别一个碱基差异的寡核苷酸，可分离DNA片段，如微卫星（STR）分析，可改变凝胶的浓度不控制分离的范围，如PCR产物的分析。 胶束电动斩学毛细管色谱（Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography，MECC） 分离原理：是电泳技术和色谱技术的交叉，当把离子型表面活性剂加入缓冲液中，并且其浓度足够大时，这种表面活性剂的单体就结合在一起，形成球体（胶束）。目前以十二烷基磺酸钠（SDS）胶束用的最为普遍，MECC存在二个相之间分配，由于它们在胶束中具有保留能力而产生不同的保留时间，和CZE一增，缓冲液在管壁处形成正电，产生强烈的向负极方向移