分子生物学技术PPT.pptVIP

(四) 核酸探针技术在动物检疫中的应用　核酸探针技术是目前分子生物学中应用最广泛的技术之一，是定性或定量检测特异RNA或DNA序列的有力工具。核酸探针可用以检测任何特定病原微生物，并能鉴别密切相关的毒 (菌)株和寄生虫。目前，各种常见病毒病的诊断和研究都已应用到核酸探针技术，这方面的研究报道数以万计且与日俱增。但该项技术的操作毕竟比常规方法复杂，费用较高，在动物检疫中尚未推广。多在实验室内对病原作深入研究时使用。 * * 一、分子生物学概念（一）基本概念（二）基因的碱基顺序与蛋白质的氨基酸顺序（三）基因的结构（四）基因的表达与调控 （一）基本概念基因：是编码蛋白质或RNA分子遗传信息的基本遗传单位。从化学角度观察，基因则是一段具有特定功能和结构的连续的脱氧核糖核酸序列，是构成巨大遗传单位染色体的重要组成部分。顺反子：顺反子和基因这两个术语是互相通用的。一般来说，一个顺反子既是一个基因，大约含有1500个核苷酸对，是由一群突变单位和重组单位组成的线性结构。 因此，顺反子概念表明：基因不是最小单位，它仍然是可分的；并非所有的DNA序列都是基因，而只有其中某一特定的多核苷酸区段才是基因的编码区。每一个顺反子就是一段核苷酸序列，或者是一个基因的DNA或RNA单元，它编码一种完整的多肽链。顺反子是功能单位，它是由许多可以突变的位点组成的，而这些位点之间又可以发生交换。多体蛋白质（multimeric proteins）：由数个亚基组成的蛋白质。 同型多体蛋白质：在多体蛋白质中，如果所有的亚基都是同样的，这种蛋白质就属于同型多体（homomultimer）蛋白质，由一种基因编码。异型多体（heteromultimer）蛋白质：亚基各不相同的蛋白质，由多种基因编码。如血红蛋白。 （二）基因的碱基顺序与蛋白质的氨基酸顺序1. 中心法则（central dogma）：既遗传信息是从DNA流向RNA，再由RNA流向蛋白质而遗传信息从DNA直接到蛋白质的传递，只是一种理论上的可能性，迄今尚未得到证实。 2. 密码子：每3个碱基编码一种氨基酸，就会编码出64种（43=64）不同的氨基酸。蛋白质分子是由20种不同的氨基酸构成的，因此，1种氨基酸可有几个不同的密码子，既3个碱基甚至更多的碱基编码一种氨基酸是必要的。遗传密码是否重叠？研究证实：遗传密码是不重叠的。三联体之间是否存在着“逗号”？研究证实：碱基的阅读是从一个固定的起点按序进行的，不存在有什么“逗号”的问题。…QABCQDEFQGHIQJKLQ… （三）基因的结构基因的编码区（即转录区）是连续不断的序列，包括一个起始密码子ATG和一个终止密码子TAA。编码区的两侧是转录而不转译的侧翼序列区，其中5`非转译区简称5`UTR，含有一个核糖体结合位点及一个转录起始信号；3`非转译区简称3`UTR含有一个转录终止信号。无论是真核的基因还是原核的基因，都可划分成编码区和非编码区两个基本组成部分。编码区含有大量的可以被细胞质中转译机器阅读的遗传密码，包括起始密码子（通 常是AUG）和终止密码子（UAA，UAG或UGA）。非编码区结构中的5`末端非转译区（5`UTR）和3`末端非转译区（3`UTR），对于基因遗传信息的表述是必要的，但它们都不会被转译成多肽序列。真核基因与原核基因的区别：事实上，真核生物的基因都是以单顺反子的形式存在，因此它们编码的也都是单基因产物。而大肠杆菌类原核生物往往是多顺反子，它转录的是一种大分子量的mRNA，可同时编码两种甚至数种的基因产物。 （四）基因的表达与调控结构基因(structural gene)：编码细胞成份，如代谢酶类、转运蛋白质和细胞骨架成份等的基因。调节基因（regulatory gene)：编码控制其他基因表达的RNA或蛋白质产物的基因。操纵基因（operator): 指接受来自调节基因合成的调节蛋白的作用，使结构基因转录活性得以抑制的特定的DNA区段，也称为控制单元。 储藏在基因中的遗传信息分转录和转译两步进行表达，这种遗传信息从DNA到RNA再到蛋白质的流向，在所有的细胞类型中都是受到高度调节的，同时在有些情况下也是严格协同的。基因表达的此种严格调控机理，保证细胞不会浪费能量用于合成它所不需要的基因产物。从基因研究上，操纵子概念比顺反子又进了一步。即基因不但在结构上是可分的，而且在功能上也是有分工的。同时，有的基因控制蛋白质产物的合成，而有的基因并没有直接的产物。 操纵子模型 二、核酸探测技术（一）指纹图谱（二）核酸分子杂交 （一）、指纹图谱指纹图谱：即核酸酶切图谱，对生物的蛋白质、DNA和RNA进行分析的电泳图、杂交放射性自显影图等。在微生物研究上，主要是用限制性内切酶（ERA）对病