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分子生物学技术PPT.ppt 42页

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(四) 核酸探针技术在动物检疫中的应用  核酸探针技术是目前分子生物学中应用最广泛的技术之一,是定性或定量检测特异RNA或DNA序列的有力工具。核酸探针可用以检测任何特定病原微生物,并能鉴别密切相关的毒 (菌)株和寄生虫。目前,各种常见病毒病的诊断和研究都已应用到核酸探针技术,这方面的研究报道数以万计且与日俱增。但该项技术的操作毕竟比常规方法复杂,费用较高,在动物检疫中尚未推广。多在实验室内对病原作深入研究时使用。 * * 一、分子生物学概念 (一)基本概念 (二)基因的碱基顺序与蛋白质的氨基酸顺序 (三)基因的结构 (四)基因的表达与调控 (一)基本概念 基因:是编码蛋白质或RNA分子遗传信息的基本遗传单位。从化学角度观察,基因则是一段具有特定功能和结构的连续的脱氧核糖核酸序列,是构成巨大遗传单位染色体的重要组成部分。 顺反子:顺反子和基因这两个术语是互相通用的。一般来说,一个顺反子既是一个基因,大约含有1500个核苷酸对,是由一群突变单位和重组单位组成的线性结构。 因此,顺反子概念表明:基因不是最小单位,它仍然是可分的;并非所有的DNA序列都是基因,而只有其中某一特定的多核苷酸区段才是基因的编码区。 每一个顺反子就是一段核苷酸序列,或者是一个基因的DNA或RNA单元,它编码一种完整的多肽链。顺反子是功能单位,它是由许多可以突变的位点组成的,而这些位点之间又可以发生交换。 多体蛋白质(multimeric proteins):由数个亚基组成的蛋白质。 同型多体蛋白质:在多体蛋白质中,如果所有的亚基都是同样的,这种蛋白质就属于同型多体(homomultimer)蛋白质,由一种基因编码。 异型多体(heteromultimer)蛋白质:亚基各不相同的蛋白质,由多种基因编码。如血红蛋白。 (二)基因的碱基顺序与蛋白质的氨基酸顺序 1. 中心法则(central dogma):既遗传信息是从DNA流向RNA,再由RNA流向蛋白质 而遗传信息从DNA直接到蛋白质的传递,只是一种理论上的可能性,迄今尚未得到证实。 2. 密码子:每3个碱基编码一种氨基酸,就会编码出64种(43=64)不同的氨基酸。蛋白质分子是由20种不同的氨基酸构成的,因此,1种氨基酸可有几个不同的密码子,既3个碱基甚至更多的碱基编码一种氨基酸是必要的。 遗传密码是否重叠?研究证实:遗传密码是不重叠的。 三联体之间是否存在着“逗号”?研究证实:碱基的阅读是从一个固定的起点按序进行的,不存在有什么“逗号”的问题。 …QABCQDEFQGHIQJKLQ… (三)基因的结构 基因的编码区(即转录区)是连续不断的序列,包括一个起始密码子ATG和一个终止密码子TAA。编码区的两侧是转录而不转译的侧翼序列区,其中5`非转译区简称5`UTR,含有一个核糖体结合位点及一个转录起始信号;3`非转译区简称3`UTR含有一个转录终止信号。 无论是真核的基因还是原核的基因,都可划分成编码区和非编码区两个基本组成部分。 编码区含有大量的可以被细胞质中转译机器阅读的遗传密码,包括起始密码子(通 常是AUG)和终止密码子(UAA,UAG或UGA)。非编码区结构中的5`末端非转译区(5`UTR)和3`末端非转译区(3`UTR),对于基因遗传信息的表述是必要的,但它们都不会被转译成多肽序列。 真核基因与原核基因的区别: 事实上,真核生物的基因都是以单顺反子的形式存在,因此它们编码的也都是单基因产物。而大肠杆菌类原核生物往往是多顺反子,它转录的是一种大分子量的mRNA,可同时编码两种甚至数种的基因产物。 (四)基因的表达与调控 结构基因(structural gene):编码细胞成份,如代谢酶类、转运蛋白质和细胞骨架成份等的基因。 调节基因(regulatory gene):编码控制其他基因表达的RNA或蛋白质产物的基因。 操纵基因(operator): 指接受来自调节基因合成的调节蛋白的作用,使结构基因转录活性得以抑制的特定的DNA区段,也称为控制单元。 储藏在基因中的遗传信息分转录和转译两步进行表达,这种遗传信息从DNA到RNA再到蛋白质的流向,在所有的细胞类型中都是受到高度调节的,同时在有些情况下也是严格协同的。基因表达的此种严格调控机理,保证细胞不会浪费能量用于合成它所不需要的基因产物。 从基因研究上,操纵子概念比顺反子又进了一步。即基因不但在结构上是可分的,而且在功能上也是有分工的。同时,有的基因控制蛋白质产物的合成,而有的基因并没有直接的产物。 操纵子模型 二、核酸探测技术 (一)指纹图谱 (二)核酸分子杂交 (一)、指纹图谱 指纹图谱:即核酸酶切图谱,对生物的蛋白质、DNA和RNA进行分析的电泳图、杂交放射性自显影图等。在微生物研究上,主要是用限制性内切酶(ERA)对病

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