黄曲霉毒素B1在基于DNA修饰金电极界面上的电化学生物传感-农产品加工与贮藏工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 A Dissertation Submitted for the Degree of Master Electrochemical Biosensing for Aflatoxin B1 Based on DNA Modified Au Electrodes Interface By Fang Junjie Hefei University of Technology Hefei, Anhui, P.R.China April, 2014 合肥工业大学 本论文经答辩委员会全体委员审查 ，确认符合合肥工业 大学学历硕士学位论文质量要求。 答辩委员会签名〈工作单位、职称、姓名〉 主席 :安徽省农科院，研究员、硕士生导师 难件 委员:合肥工业大学，教授博士生导师 dt例立 合肥工业大学，教授、博士生导师 ρ卢一户e 合肥工业大学，教授、博士生导师多伦 合肥工业大学，教授、博士生导师 去了友 导Yffi: ?EI 大学 vfι 致谢 致 谢 回想起研究生一年级入学时的画面，才感叹时光的脚步太过匆匆，研究生三 年的生活已然进入尾声。仿佛眨眼间，我就从一名学生变成了即将参加工作，为 幸福美好生活去打拼的青年职业人。在研究生学期阶段，有许多曾经给过我教导 与帮助的人，我要感谢他们。 首先要感谢的肯定是我的导师，叶永康老师。他不仅是我学习上的良师，也 是我生活中的益友。实验中，从最基本的实验方法与操作上给于我指导，在叶老 师的悉心教导下，我对原本几乎零基础的电化学有了相对深刻的了解，在本论文 的选题一直到最后论文的写作与修改上，叶老师也花费了相当大的经历。正是在 叶老师的帮助下，我才能得以成为一名中国共产党员。 其次，我要感谢已经毕业的刘韩凤师姐、孙玉雪师姐以及余丽师姐。在我开 始做实验之前，是她们不厌其烦地给我讲解实验原理，示范实验的基本操作，后 期的大、小论文写作方面也教会我很多方法与技巧。还有实验室的师弟和师妹， 感谢你们在我实验失败的时候那支持与鼓励的眼神，在你们身上我也学到了很多 永远受用的东西。 再次，还要感谢评审老师和答辩委员会的老师们，感谢你们对我的论文工作 的批评与指正。 最后我要感谢我的家人，感谢你们生活上无微不至的关心，你们是我最坚强 的后盾！ 作者：方俊杰 时间：2014 年 3 月 28 日 I 摘要 摘 要 黄曲霉毒素 B1(Aflatoxin B1, AFB1),被世界卫生组织列为Ⅰ类致癌物的毒素， 它的危害已经危及到了全世界人民的公共安全，世界各国也都已经在关注 AFB1 的污染问题。各国都制订了针对各国不同国情的规章制度，以限定 AFB1 在食品 及动物饲料中的含量。同时，各国的科研工作者也都在为研究更快，更简易的 AFB1 检测设备以及检测方法。 本论文的主要工作包括： 1. AFB1 单克隆抗体修饰金电极制备 AFB1 免疫传感器 制备了快速检测黄曲霉毒素 B1 的黄曲霉毒素 B1 抗体@纳米金修饰金电极电 化学传感器单元。实验选用循环伏安法（CV）和示差脉冲伏安法（DPV）研究黄 曲霉毒素 B1 在修饰电极上的电化学响应，确定了该传感器测定黄曲霉毒素 B1 的 最优实验条件（黄曲霉毒素 B1 单克隆抗体的最适修饰条件为 4 ℃、8 h，PBS 缓 冲溶液的最适 pH 值为 7.4），建立了测定黄曲霉毒素 B1 的电化学方法，其线性方 程为：i(μA) = 0.02166 C +18.8682，线性相关系数 R = 0.9997；线性检测范围为 1.427 ~ 150 ng mL-1，对不同猪饲料样品检测的加标回收率在 94.44 ~ 101.36 %。 2. 基于电化学 ssDNA 损伤传感对饲料中黄曲霉毒素 B1 的检测 构建了一种快速、简便、价廉的检测黄曲霉毒素 B1（AFB1）的新型电化学 DNA 生物传感器，实现对 AFB1 的快速检测。试验中采用电化学方法为分析方法， 对试验条件进行优化，并据最优化条件建立了标准曲线、检测样品。试验最终得 出的最优化条件为：ssDNA 于 4 ℃下在裸电极上自组装 14 h，ssDNA-Au 电极与 cDNA 的杂交时间为 2 h，然后得到 dsDNA-Au 电极，以 60 μM 亚甲基蓝（Methylene blue, MB）为电化学活性指示剂，pH = 7.0，0.2 M 磷酸盐缓冲溶液（PBS）配制的 铁氰化钾溶液为缓冲底液，不同浓度的 AFB1 对电极的损伤时间为 9 min，不同浓 度的 AFB1 对电极的损伤温度为 37 ℃。该方法对 AFB1 的线性检测范围为 21.839 ~ 800 ng mL-1，加标回收实验的回收率在 98.34 % ~ 101.68 %。建立的电化学 DNA 损伤方法可以实现对 AFB1 快