毛白杨MYB055转录因子在次生壁合成中的调控机制研究-遗传学专业毕业论文.docxVIP

西吊．大謦硕士学位论文 西吊．大謦 硕士学位论文 毛白杨MYB055转录因子在次生壁合成中 的调控机制研究 论文作者： 叶胜龙 指导教师： 罗克明教授 学科专业： 遗传学 西南大学生命科学学院 中国·重庆 201 5年4月 万方数据 SoUTH、ⅦSTUNIVERSITY SoUTH、ⅦSTUNIVERSITY Master Dissertation The Regulation Mechanism of the Poplar PtoMYB05 5 Transcription Factor Involved in Secondary Cell Wall Formation Graduate：Shenglong Ye Supervisor：Prof．Keming Luo Major：Genetics School of Life Science，Southwest University Chongqing。China April，20，2015 万方数据 独创性声明学位论文题目：垂自拯幽Q至5整丞国王查达生壁金盛虫的调控扭剑 独创性声明 学位论文题目：垂自拯幽Q至5整丞国王查达生壁金盛虫的调控扭剑 互毯 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中己加 了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同 仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文作者：叶耻垃 签字日期：乃舌年∥月‘口日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院(筹)可以将学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密，口 保密期限至年月止)。 学位论文作者签名：冲牡芝 导师签名 签字日期：易侈年／月肜日 签字日期 月f c7日 万方数据 目 目 录 摘要} 。l Abstract III 第l章文献综述 1 1．1杨树的生物学特征及研究进展 1 1．2次生壁 ．2 1．3木质素 2 1．3．1木质素的组成 ．2 1．3．2木质素单体的生物合成 ．．3 1．3_3木质素的应用 ．．3 1．3．4木质素代谢途径的调控 ．4 1．3．4．1关键酶基因对木质素生物合成的调控 ．．4 1．3．4．2转录因子对木质素生物合成的调控 一5 1．4 MYB转录因子 。7 1．4．1 MYB转录因子的结构 7 1．4．2 MYB转录因子在木质素合成中的作用 8 1．4．3 MYB转录因子进化上的保守性 9 第2章引言 ．．11 2．1研究目标 11 2．2研究内容 儿 2．2．1转录因子功能预测 儿 2．2．2 PtoMYB055基因的扩增 11 2．2．3 PtoMYB055转录因子在不同组织中的表达特异性分析 11 2．2．4 PtoMYB055转录因子的启动子分析 一1l 2．2．5 PtoMYB055转录因子的转录活性分析 。12 2．2．6转基因毛白杨的功能分析 12 2．3技术路线 13 第3章实验材料与方法 ．15 3．1实验材料 一15 3．1．1植物材料 15 3．1．2菌种及质粒 15 3．2仪器和设备 ．．15 3．3实验试剂 一16 3．3．1试剂及试剂盒 16 3．3．2常用抗生素、激素及培养基的配制 17 3．4实验方法 。18 3．4．1氨基酸序列比对 18 3．4．2进化树分析 18 3．4．3毛白杨不同组织RNA的提取及反转录 18 3．4．3．1毛白杨不同组织RNA的提取 ．18 3．4．3．2 KNA的反转录 18 3．4．4基因的组织特异性分析 19 3．4．5基因的引物设计 20 万方数据 3．4．6 3．4．6 PtoMYB055的PCR扩增及载体构建 ．20 3．4．7 CaCl2法制备大肠杆菌DH5ct感受态细胞 ．21 3．4．8连接反应物及重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞 2l 3．4．9阳性单克隆的扩大培养与质粒提取 21 3．4。10植物表达载体的农杆菌转化 ．22 3．4．1l毛白杨的遗传转化 23 3．4．12酵母表达载体的构建、感受态细胞的制备 ．23 3．4．13启动子的克隆、载体构建 ．25 3．4．14基因的亚细胞定位 26 3．4．15 PfDl价毋D”超表达植株的分子检测 ．27 3．4．16转基因毛白杨的荧光定量PCR检测 27 3．4．17转基因植株中木质素含量的测定 ．27 3．4．18石蜡切片 27 3．4．19瞬时共侵染 ．．28 3．4．20问苯三酚染色