酶育牛黄对apoE--小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响及其机制研究-护理学专业毕业论文.docxVIP

泰山医学院硕士学位论文酶育牛黄对apoE4小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响及其机制研究 泰山医学院硕士学位论文 酶育牛黄对apoE4小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响及其机制研究 研究生：邵明珠 专业：护理学 导师：刘化侠教授 秦树存教授 中文摘要 目的 探讨酶育牛黄(calculus bovis cultivated by glucuronidase，CBCG)对载脂蛋白E 基因敲除(apoE乒)小鼠动脉粥样硬化斑块形眈的影响，阐明CBCG对血浆和动脉炎 症和氧化应激水平的作用。 方法 40只7—8周龄雄性apoE乒小鼠，随机分为4组，分别为对照组(酶育牛黄溶媒 灌胃组，n：lO)、CBCG低、中、高剂量治疗组(O．25 g／kg·d、O．75 g／l(g’d、2．25 gg‘d， n=lO)。适应性喂养1周后，连续灌胃8周，同时给予高脂(15．8％)高胆固醇(1．25％) 饮食，自由饮水。灌胃8周末，禁食12小时，麻醉，小鼠内眦静脉取血，取材。解 剖分离主动脉全长，包埋心底制备主动根部连续冰冻切片，油红0染色主动脉全长 和主动脉根部，检测粥样斑块脂质含量，计算斑块面积；Elisa检测血浆炎症因子IL一6 和TNF—Q水平，分光光度计法检测血浆丙二醛(MDA)和对氧磷酯酶一1(PON 1) 水平；Elisa测定CBCG血浆活性成分胆红素(Bilimbm)和牛磺酸(Taurine)水平； 免疫荧光化学方法检测主动脉瓣部位巨噬细胞标志分子(MOMA一2)、血管细胞粘附 分子(VC√蝴一1)、细胞间粘附分子(ICAM—1)和a肿瘤坏死因子(TNF一0L)，4羟 基壬烯醛(H】NE)，磷酸化Janus酪氨酸激酶(P-JAK2)及信号转导和转录活化因 子1(P—STATI)表达水平。动物实验最后，酶法测定血浆总胆固醇(TC)、高密度 脂蛋白胆固醇(HDL—C)水平；肝、肾脏制作石蜡切片，HE染色，进一步了解CBCG 长期灌胃给药的安全性。细胞实验，体外培养RAW264．7巨噬细胞，OX—LDL(100jag／m1) 刺激巨噬细胞，CBCG(溶解于DMSo)直接干预细胞，Elisa方法检测细胞培养液中 炎症因子IL一6和IFN-，y水平；western blot检测J√UQ／S吖汀l／SOCSl信号通路蛋A表 达。 万方数据 泰山医学院硕士学位论文相同周龄雄性C57BL／6J小鼠41只，随机分3组对照组(酶育牛黄溶媒灌胃组， 泰山医学院硕士学位论文 相同周龄雄性C57BL／6J小鼠41只，随机分3组对照组(酶育牛黄溶媒灌胃组， n=14)、CBCG高、中剂量治疗组(2．259／kg·d，n=14；0．759／kg·d，n=13)。同样给予高 脂饲料，连续灌胃12周后，禁食12h，麻醉，小鼠内眦静脉取血，通过超速离心法 获得低密度脂蛋白(LDL)，高密度脂蛋白(曲L3)。通过胆固醇逆向转运(RcT) 功能实验检测HDL对巨噬细胞源性泡沫细胞的胆固醇溢出的影响；通过HDL对Cu2+ 诱导LDL氧化程度的保护作用，检测HDL的抗氧化功能；通过MTT比色法检测内 皮细胞存活实验，检测HDL抗内皮细胞凋亡功能；通过单核细胞粘附实验检测HDL 保护内皮细胞的功能。 结果 与对照组组相比，油红0染色结果显示CGCB治疗组显著抑制主动脉根部和全 长主动脉的动脉粥样斑块形成；血浆Elisa检测血浆IL一6，TNF．仅水平显著降低；血 浆氧化生物指标丙二醛(MDA)显著降低，对氧磷酯酶一1(PONl)显著升高；CBCG 血浆有效成分检测结果显示，CBCG高剂量治疗组血浆中胆红素水平显著高于对照 组，血浆牛磺酸呈水平升高趋势，但差异无统计学意义。主动脉根部免疫荧光结果表 明，CBCG可抑制炎症指标粘附分子VCAM．1、ICAM—l和TNF—u的表达，减少血管 壁巨噬细胞浸润；CBCG可抑制炎症通路JAK2／STATl通路蛋白磷酸化；CBCG可抑 制氧化指标HNE表达，降低脂质氧化程度；血浆生化检测显示，CBCG治疗组总胆 固醇(TC)和非高密度脂蛋白胆固醇(non—HDL—C)水平变化无统计学意义，高密 度脂蛋白胆固醇(HDL—c)水平显著升高；肝肾HE染色未见明显异常。细胞实验， CBCG可显著抑制OX—LDL刺激RAW264．7巨噬细胞产生的IL一6，IFN-t水平，抑制 JAK2和STAT的磷酸化，下调SOCSl水平。另外，CBCG可显著改善C57BL／6J小 鼠血浆HDL功能，主要表现在促进巨噬细胞内[3HI标记胆固醇的溢出；抑制Cu2+诱 导的LDL氧化作用；抑制单核细胞粘附作用和内皮细胞保护作用。 结论 1．CBCG抑制apoE士小鼠动脉粥样硬化斑块的形成； 2．CBCG抑制apoE乒小鼠动脉粥样硬化斑块形成可能与改善血浆炎症和氧化应 激水平有关