抗猪心肌肌球蛋白单克隆抗体的制备及其在心肌损伤诊断中的应用分析-基础兽医学专业毕业论文.docxVIP

中文摘要 中文摘要 急性心肌梗死(AMI)、不稳定心绞铺 (UAP)、急性冠状动脉综合征(ACS)等心血管疾病引起 的心肌损伤是危害人类健康的头号杀手，如能早期发现将对患者具有重大意义。但由于心肌 结构及功能的特殊性，早期心肌损伤的检测受到较多的限制，多年来寻找诊断心肌损伤的各 种生化标志物及其诊断方法一直是吕豆学工作者努力探索的课题，但至今仍然没有一种能够完 全满足l临床需要的诊断标志物和诊断方法. 本研究在查阅大量文献资料和 l进行广泛的临床调查的基础上，选挥心肌肌球蛋白作为心 肌损伤的诊断标志物，图绕 t忠心肌肌球蛋白单克隆抗体的研制，开展了三个层次的研究工作。 抗心肌肌球蛋白单克隆抗体的制备心肌肌球蛋白 (Cardi缸 My臼in，CM) 用于心肌损伤的 诊断，较心电图和其它血清酶或肌红蛋白更敏感和特异.在心肌受到损伤或酸性 pH时，由心 肌肌球蛋白构成的粗肌丝发生裂解， CM轻链(CMLC)和重链 (CMHC) 释放入血. CMLC 出现 早且持续时间长. CMHC的结构特征决定其具有良好的特异性，所以心肌肌球蛋白的测定是 迄今为止诊断心肌损伤和研究心肌损伤及保护较特异的生化指标，可用于 AMI 的早期诊断和后 期治疗观察.由于猪与人的 CM氨基股序列存在99% 以上的同源性，而人类心肌肌球蛋白抗原 难以获得，所以我们采用猪 CM代替人CM作为抗原兔疫小鼠，经过七次融合，采取问接 ELISA 方法，从3000多个孔中筛选出 14株，分别来自5个不同融和孔的能稳定分泌高效价的抗猪心肌 肌球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株.生物学初步鉴定结果显示，制得的单克隆抗体具有亲 和力离，特异性强等特点.为下一步诊断方法的建立奠定了良好的基础. 心肌肌球蛋白双抗体夹心 ELISA法的建立及初步应用用和j备的抗CM的单克隆抗体作为 第一抗体包被酶标板，辣根过氧化物酶标记兔抗 CM多肤抗体作为第二抗体，初步建立了双抗 体夹心ELISA法，对血消中的心肌肌球蛋内可进行定性、定量地检测，利用标准曲线测定其是 小检测下限为 0.3ng/ml. 标准曲线在 J .0-20.0ng/mJ范围内续性良好.初步应用于检测 30例急性 心肌急性心肌梗塞患者血消中 CM水平，并与肌钙蛋白肢体金免疫层析试剂卡同期比较，表明 两种方法的符合率为 84.8%. 并具有良好的重现性和稳定性. 心肌肌球蛋白肢体金免疫层析诊断方法的建立及初步应用成功制备了性能稳定、免疫学 活性好的金标CM多JJt抗体，将其同定于琼璃纤维膜上作为显色源:抗 CM单克隆抗体结合于 硝ftI1纤维素膜上作为捕获抗体，制成免疫层析试纸条.该试纸条的检测灵敏度可达 5ng/ml. 俭 测30例急性心肌梗塞患者血消 CM水平，并与Roche肌钙蛋白胶体金兔疫层析试剂卡比较，符 合率达81.8%.该试开tl条在4C下至少可保存7.5个月. 结论:本研究成功制备了抗猪心肌肌球蛋白单克隆抗体，并将其应用在心肌肌球蛋白的 诊断上，初步建立了 ELISA 方法和胶体金免疫层析试剂条法，研究表明这两种方法特异性强、 稳定性好、操作简便，对心肌损伤的早期诊断具有一定的诊断价值，可为临床提供很好的参 考。 关键词:心肌损伤肌球蛋臼单克隆抗体夹心 ELl SA 免疫肢体金 ABSTRACT Development of Anti-Porcin e-Cardiac Myosin Monoclonal Antibodies and Their Application for Diagnosis oflschemic Myocardial Diseases Zhou-Weiying (College of Animal Technology，Southwest Agricultural University，Cho鸣qing4ω716) Abstract The myo?ardial injul)c?回edbyAcu恒 my臼:ardiaJ infarction (AMI). Acu恒 coronarγS归命。me (ACS)，Uns胁leangina 萨比伽is (UAP) et aJ， ar回创?r I:al甘iOVl鹏ular dis幽se is a maj田killer in our country as weJl幅 in thede四loped world 臼恒。fm田t critical issue in acute cardiac event is to 由e ωπ自t and prom网iagnis for proper treatmenl However. dl蜡 to the often 国ymptomatic featur