赖氨酸生产菌某些特性及发酵试验的研究.docVIP

ZL-9601赖氨酸生产菌某些特性及发酵试验的研究 2006-1-5 14:52:38 新闻来源：农业生物技术学报 李秀锦仲飞刘绍军常学东孙树杰赵彦波冀振华 (河北农业技术师范学院，昌黎066600) 摘 要： 本研究对ZL-9601赖氨酸生产菌菌株的形态、培养特性和生理生化特性进彳了了初步鉴 定和分析，并以糖蜜为主要原料，初步确定了该菌的产酸能力。结果表明，该菌为短杆菌(0.8- 1.0x1.0?2.5 pm)z需氧，发酵最适温度30 C,最适pH7.0?7.2,最适碳源为葡萄糖，最适氮源 为硫酸较；该菌不分解赖氨酸，町耐15%的赖氨酸，耐30%的葡萄糖。以糖蜜为主要原料，金最适温 度和pH的条件下，产酸可达6%以上。 关键词：ZL?9601菌种；赖氨酸；发酵；菌种特征 赖氨酸是人和多种动物的必需氨基酸。在谷类食品和饲料中添加适最赖氨酸可提高这类食品或饲 料中蛋白质的营养价值。忖前，在国内外帀场上，赖氨酸的需求量日益增加，培有赖氨酸高产菌株和研 究最佳发酵工艺条件便受到人们的普遍重视［1-4\许多高产菌株陆续被选冇出來。如国内选冇的 TL?1菌株产酸量为4.5%。为进 涉提高赖氨酸的产暈，人们乂在这些菌种的基础上通过各种选育过 程得到更高产的菌株9。如ZL-9601赖蹴酸生产菌株就是由谷氨酸棒杆菌AS1.563通过进?步诱变 处理选育出的窩产菌株。木研究主要就ZL-9601菌株的形态、培养特性和生理生化特性进行了初步鉴 定和分析，并以糖蜜为主耍原料进行发酵试验，旨在为实际生产确定最佳发酵条件提供科学依据。 1材料与方法 1.1菌种 科院微生物所提供)的诱变株，遗传标记为AECrz Hom-o 1.2主要培养基 1.2.1斜面种子培养基 牛肉膏1.1%,蛋白腺1.0%,葡萄糖0.5%, NaCI 0.5%,琼脂0.2%, PH7.0,在0.14mpa压力下灭菌20minz后置于37 °C培养箱培养24h,备用。 1.2.2发酵种子培养基 糖蜜2.0%,豆饼水解液0.5%, (NH4)2SO4 0.4%, CaCO3 0.5%, K2HPO4 0.1%, MgSO4 0.04%z pH7.0，丁? 250mL 三角瓶内装 25mL 种子培养基，在 0.14mpa 压力下灭菌20 mino 发酵培养基 糖蜜20%,豆饼水解液1.0%,玉米浆0.6%, (NH4)2 SO4 2%, K2HPO4 0.1%, MgSO4 0.05%, FeSO4 20mgz MnSO4 20mgz pH7.0z f 250mL ?:角瓶装液 25mL 发酵 液,在0.14mpa压力灭菌20minz冷却后接种。 1.3培养条件 将经斜ifii培养活化的菌种接种于发酵种(培养基中，置于往复摇床上振荡培养24h(30°C)为种r 培养物;按1 ： 10(64xlC)7/mL菌体)的接种量将种子培养物接种于发酵培养基屮，在30±10°C, PH7.0?7.2条件下，在往复式摇床(振幅5?8 cm,频率120次/min)发酵72h。 1.4其它特殊培养基 淀粉水解培养基，“引味试验培养基，屮基红试验培养基，M?R试验培养棊，V?P试验培养某，芽抱 培养基，高丝氨酸营养缺陷型培养基等。 1.5试验及测定方法 菌体形态观察、菌种培养特性和菌种主要牛理牛化特性检查主要参照《工业微纶物试验技术手册》 的方法叭 发酵液赖氨酸的测定采用苗二酮比色法ril\并加以改进。其主耍操作过程：吸取发酵液4mL,离 心（6000r/min, 10min）i-菌体及杂质。取上清液2mL,加讳匚酗试剂（A液：即三? 1.25g溶于94 mL乙:醇甲瞇中；B液:CuCI2*2H2O 1.97g溶于32mL0.1mol/L柠檬酸溶液中；将A、B两液混 合，用蒸他水定容到250mL）4mLz混合，在沸水浴加热20min,冷却后在生化自动分析仪测定475 nm处的吸光度值，通过查赖氨酸标准曲线得知发酵液中赖氨酸的浓度。 1.6主要仪器 560■生化分析仪（上海第三分析仪器厂），SHA-C水浴恒温振动器（江苏常州国华仪器厂），高压蒸 汽灭菌锅，显微镜，超净工作台等。 2结果与分析 2.1菌体形态特征观察 由表1可以看出，该菌为格兰氏阳性杆菌。短杆状或球形，无鞭毛，不形成芽抱。斜而菌种细胞 较小，出被培养到-级种f培养基时，繭体体积变人，但在二级种『培养基和发酵培养基时（开始产 酸），菌体又渐渐变小、变圆。 2.2细菌的培养特征 表1 菌体形态特征 Table 1 The morphological characteristics of the strain 项G Items 培养基 Medium 形态特征 Morphological characteristics 格兰氏染 色 普通肉汁斜面和平板