课件：地中海贫血的分子基础和产前诊断徐湘民.pptVIP

Gap-PCR技术用于?-地贫的产前诊断 M N P B Fa Mo Fe Fa Mo Fe Fa Mo Fe Normal Heterozygote Homozygote Family 1 Family 2 Family3 Normal Mutant 家系分析：RDB用于?-地贫的产前诊断 -29 -28 cd17 cd26 1-1 1-5 cd27/28 cd41/42 正常 突变 N M N M N M cd 43 cd71/72 654 基因型 父亲 CDs41-42 (?CTTT) / ?N 母亲 CDs17 (A?T) / ?N 胎儿 CDs41-42 / CDs17 (A?T) 正常对照 ?N / ?N 基于DNA分析的检测策略 ? DNA分析需在血液学表型结果的指导下进行 ? DNA分析需优先针对种族特异性常见的突变 血液学分析指导血红蛋白病诊断的一般原则 指标 ?-地贫 ?-地贫 ?/?-地贫 ??-地贫 MCV (fL) 80 80 ? 80 ? 80 MCH (pg) 27 27 ? 27 ? 27 Hb A2 (%) 2.5 3.5 3.5 3.0 Hb F (%) 1.0 1 - 3 ~ 1 5 - 35 Hb Variants Hb CS, Hb QS Hb E ─ ─ ζchains + ─ + ─ DNA 检测 ?-珠蛋白基因 ? -珠蛋白基因 ?/?-珠蛋白基因 ?-珠蛋白基因 用于? 和 ?地贫临床基因分型的实验室流程 Gap-PCR / MLPA (1) 临床样品 ?-地中海贫血 ?-地中海贫血 Gap-PCR / MLPA (2) RDB / PMCA (1) RDB / PMCA (2) FBC / Hb Analysis Hb CS etc Hb F 5% 中国南方发现的5种占人群90%的常见 地中海贫血基因突变 ?-地中海贫血突变 ?-地中海贫血突变 (– –SEA)缺失 CD41-42 (-CTTT)小缺失 (–?3.7) 缺失 IVS2-654 (C→T)突变 (–?4.2) 缺失 –28 (A→G)突变 (? CS ?) 突变 CD26 (G→A)突变 (? WS ?) 突变 CD17 (A→T)突变 地中海贫血的DNA诊断 ?-地贫:基因缺失分析技术 ?-地贫:基因点突变分析技术 ? Reverse Dot Blot （RDB）: 反向点杂交 ? probe melting curve-based genotyping assay （PMCA）: 基于探针熔解曲线的基因分型 ? Gap-PCR : 缺口PCR ? Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification （MLPA）: 多重连接探针扩增 ? 检测基因拷贝数的荧光定量PCR 突变类型 Gap-PCR RDB qPCR/PMCA MLPA ?-地中海贫血 (– – SEA) ? ─ ? ? (– ? 3.7) ? ─ ? ? (– ? 4.2) ? ─ ? ? (– – THAI) ? ─ ? ? (– – 11.1) ? ─ ? ? 9点突变 ─ ? ─ ─ 其他缺失 ─ ─ ? ? ?-地中海贫血 25点突变 ─ ? ? ─ 广州型缺失 ? ─ ─ ? 中国型缺失 ? ─ ─ ? 东南亚型缺失 ? ─ ─ ? 其他缺失 ─ ─ ─ ? 目前已获准或正在申报产品注册证的 检测中国人地贫突变的分子诊断技术 3种缺失型?地贫检测试剂盒：单管多重gap-PCR法 17种?地贫突变检测试剂盒：反向点杂交法 多位点缺失型?地贫检测试剂盒： PCR荧光探针法 25 种?地贫突变检测试剂盒：荧光PCR熔解曲线法 -- HW --THAI -- FIL -- SEA --11Kb ? ? 4.2 ? ? 3.7 ?2 ? ψξ1 ?1 ξ 3’HVR ξ’HVR ψ?1 ψ?2 10kb 0kb 20kb 30kb 40kb 50kb 5’ 3’ 基因型 相对拷贝数 ζ ?2 ?1 CREBBP ?? / ?? 2 2 2 2 - ? 3.7 / ?? 2 2 1 2 - ? 4.2 / ?? 2 1 2 2 --SEA / ?? 2 1 1 2 -α3.7/-α4.2 2 1 1 2 --THAI/ ?? or -- FIL/ ??